D 7 Trypsin nguyên bào sợi ở khoang dƣới và
BÀN LUẬN 4.1 Về đặc điểm tế bào phân lập
4.1. Về đặc điểm tế bào phân lập
Phân loại một loại tế bào đƣợc mô tả bởi nhiều đặc tính khác nhau nhƣ về hình thái, về khả năng biệt hóa, khả năng tự đổi mới, khả năng nhân lên, các dấu ấn thể hiện tính gốc…Tế bào gốc trung mô là tế bào đƣợc xác định là có khả năng bám dính trên bề mặt ni cấy, khi đó chúng có hình thoi hoặc hình sao. Chúng có khả năng biệt hóa thành các tế bào chức năng khác nhau nhƣ tế bào xƣơng, tế bào sụn, tế bào mỡ, tế bào cơ ở cả in vitro hay in vivo [84].
Kết quả nghiên cứu của chúng tơi, chỉ ngày hơm sau đã thấy có các tế bào bám dính ở bề mặt ni cấy. Các mẫu tế bào sau đó đƣợc thay mơi trƣờng cứ 2-3 lần trong một tuần và chỉ trong vòng 10-15 ngày thì hầu hết các mẫu tế bào đều đạt 80-90 độ che phủ và đƣợc thu hoạch bằng quy trình sử dụng trypsin.
Trong nghiên cứu này, tế bào gốc trung mô giống nguyên bào sợi đƣợc tinh lọc thu đƣợc thơng qua phƣơng pháp phân lập có sử dụng enzyme, điều này rất khác với phân lập nguyên bào sợi từ mô. Hầu hết các nghiên cứu phân lập nguyên bào sợi là sử dụng phƣơng pháp kết dính mơ với bề mặt ni cấy và duy trì mơ trong mơi trƣờng tăng trƣởng để chờ nguyên bào sợi mọc ra sau đó sẽ thu tế bào theo phƣơng pháp của Caren năm [30]. Trong nghiên cứu của chúng tơi, các thí nghiệm ban đầu cho thấy nếu sử dụng phƣơng pháp cấy mơ kết dính thì sau 2-4 tuần theo dõi vẫn khơng thấy có tế bào mọc ra từ mẩu mô mỡ mặc dù môi trƣờng nuôi cấy là đồng nhất gồm DMEM và 10 huyết thanh bào thai bê nhƣ trong nuôi cấy ngun bào sợi. Trong khi đó gần 30 thí nghiệm phân lập tế bào thì các tế bào hình thoi hay hình sao từ mơ mỡ chỉ phân lập đƣợc bằng các thí nghiệm có sử dụng collagenase.
Quan sát từ các thí nghiệm, chúng tôi thấy, số lƣợng tế bào phân lập đƣợc từ một khối lƣợng mô mỡ là rất lớn vào khoảng 2 triệu tế bào cho mỗi gram mô. Thông qua nhuộm xanh trypan, chúng tôi thấy khả năng sống của các tế bào sau phân lập là rất lớn, đạt 94-96 . Tuy nhiên, hầu hết trong số đó khơng phải là tế
bào gốc trung mô, đa số các tế bào nổi cùng với các mảnh vỡ của mô, chúng đƣợc loại bỏ bằng việc thay môi trƣờng ni cấy sau 24-48 giờ. Chỉ một số ít các tế bào bám dính ở bề mặt nuôi cấy quan sát đƣợc sau khi hút bỏ dịch nổi. Các tế bào này sau đó nhân lên rất nhanh chóng cũng trong mơi trƣờng có 10 huyết thanh. Mặc dù chỉ từ một số rất ít tế bào ban đầu nhƣng chỉ sau hơn 1 tuần thì mật độ của chúng đã đạt 90 độ che phủ bề mặt nuôi cấy. Tuy nhiên, khi quan sát lâu hơn chúng tôi thấy hầu hết các tế bào có hình dáng của ngun bào sợi và chúng không mọc thành 2-3 lớp nhƣ các tế bào biểu mô mà chỉ mọc thành 1 lớp duy nhất kể cả khi chúng đã đạt tới độ che phủ là 100