chitinase
Chọn giống khoai chiết rút chitinase: chọn giống khoai lang có hoạt tính chitinase cao nên chọn những giống trồng chủ yếu để thu lá (lá to, cuống to và dài). Kết quả cho thấy giống khoai 143 thu chitinase có hoạt tính cao nhất. Từ các phần của cây bao gồm lá, cuống lá và dây khoai cho thấy chitinase từ lá có hoạt tính cao nhất và giảm dần đến cuống lá và dây khoai.
Tình trạng tổn thương của cây ảnh hưởng
đến hoạt tính chitinase: chitinase trong lá khoai lang bị tổn thương (do bị côn trùng ăn lá, do tác động cơ học hay bị sâu bệnh) có hoạt tính cao nhất (192 Units/ml) cao hơn 1,3 lần so với lá khoai không bị tổn thương (148 Units/ml). Kết quả thu được tương tự đối với cuống của các lá bị tổn thương có hoạt độ chitinase (82 Units/ml) cao hơn 1,6 lần so với cuống của lá không bị tổn thương (51 Units/ml).
3.2. Xác định phương pháp thu nhận chitinase DC, CPE chitinase DC, CPE
Tách chiết chitinase dịch chiết (DC): chiết chitinase bằng đệm acetat pH = 5 thu được chitinase có hoạt độ cao nhất (192 Units/ml), cao hơn 1,15 và 1,22 lần so với dung dịch muối sinh lý và nước cất. Tỷ lệ dung mơi/ngun liệu thích hợp là 1/1 chitinase thu
được có hoạt độ cao nhất (197 Units/ml). Thời gian chiết tối ưu là 10 phút.
Thu nhận chế phẩm enzyme (CPE): Chọn ethanol làm tác nhân gây kết tủa. Khi sử dụng aceton cho hoạt tính CPE là cao nhất (146 Units/ml) nhưng sự khác nhau về hoạt độ CPE
không nhiều (CPE kết tủa bằng aceton hoạt tính chỉ cao hơn 1,058 và 1,081 lần so với ethanol và amonium sunfat). Dùng amonium sulfat kết tủa thu được CPE có lẫn muối amonium sulfat, loại muối khó khăn. Trong khi
đó sử dụng aceton giá cao hơn 3,5 lần so với ethanol nên không kinh tế, aceton rất độc nên
ảnh hưởng đến sức khỏe con người. Nồng độ
ethanol trong dịch chiết đạt 65% cho hoạt tính CPE chitinase cao nhất. Thời gian kết tủa tối
ưu là 45 phút.
3.3. Một số yếu tốảnh hưởng đến chitinase DC, CPE DC, CPE
Nhiệt độ thích hợp đối với hoạt tính chitinase: nhiệt độ thích hợp của chitinase từ
lá khoai là 300C. So sánh với kết quả nghiên cứu đã công bố của các tác giả Wen-Chi Hou,
Yaw-Huei Lin, Ying-Chou Chen (1998),
enzyme chitinase chiết rút từ lá khoai lang (leaves of sweet potato), nhiệt độ thích hợp là 250C. Nhiệt độ thích hợp của chitinase thấp hơn nhiều so với nhiệt độ tối ưu của đa số
enzyme thu từ thực vật (50 – 650C).
Độ bền nhiệt của chitinase: mặc dù chitinase DC và CPE đều được xử lý ở nhiệt
độ thấp (45, 500C), thời gian xử lý ngắn (60 phút) nhưng hoạt tính giảm rất nhanh. Điều này chứng tỏ enzyme chitinase thu được từ lá khoai lang không bền với nhiệt. So sánh với các enzyme khác từ thực vật như bromeline, papain cho thấy tính bền nhiệt của chitinase từ
lá khoai lang thấp hơn.
pH thích hợp đối với hoạt tính chitinase:
pH thích hợp của chitinase DC là pH = 5,5 và CPE chitinase là pH = 6. So sánh với kết quả
nghiên cứu của các tác giả Wen-Chi Hou,
Yaw-Huei Lin, Ying-Chou Chen (1998), pH
thích hợp cho enzyme chitinase trong lá khoai lang là pH = 5.
3.4. Quá trình thủy phân chitin bằng chitinase chitinase
Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thủy phân chitin: Nồng độ CPE bổ sung 0,2% là
thích hợp. Nồng độ CPE càng tăng, tốc độ
thuỷ phân tăng, nhưng với nồng độ CPE cao