CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. Xây dựng đường cong sinh trưởng và đường cong tích lũy enzyme của chủng Trametes
Trametes polyzona HUIBF21 3.2.1. Đường cong sinh trưởng
Theo dõi sự phát triển của chủng nấm T.polyzona HUIBF21 trên mơi trường BSM lỏng, lắc 180 vịng/phút ở 30ºC. Kết quả được thể hiện ở hình 3.8 dưới đây
Hình 3.8. Đường cong sinh trưởng của T.polyzona HUIBF21 trong 15 ngày.
Dựa vào đồ thị đường cong sinh trưởng có thể thấy được chủng T.polyzona HUIBF21
có pha thích nghi kéo dài trong 6 ngày đầu nuôi cấy, lúc này chủng sinh trưởng chậm, trọng lượng khô xác định được trong 6 ngày đầu có tăng nhưng tăng chậm, dao động trong khoảng 50 – 55 mg. Đó là do lúc này tế bào cần một thời gian nhất định để thích nghi mơi trường và tổng hợp các enzyme nhằm sử dụng được các chất dinh dưỡng mới.
Pha tăng trưởng bắt đầu từ ngày thứ 7 và kéo dài trong 6 ngày. Lúc này quá trình sinh trưởng của chủng nấm tăng rất mạnh, trọng lượng khô tăng gần gấp 2 so với những ngày đầu, và đạt trọng lượng khô cao nhất vào ngày thứ 12 là 190,92 mg, có được điều này là do chúng gặp điều kiện ni cấy thích hợp và dinh dưỡng dồi dào.
Tuy nhiên sang đến ngày thứ 13 thì sinh khối chủng lại bắt đầu giảm (pha cân bằng), sinh khối đạt hàm lượng 190,79 mg. Trong giai đoạn này, số lượng tế bào sống là không thay đổi, có thể do số lượng tế bào mới sinh ra cân bằng với số lượng tế bào chết đi, hoặc là do chủng nấm ngừng sinh sản mà vẫn giữ nguyên hoạt tính trao đổi chất.
Tế bào bước vào pha ổn định chủ yếu là do sự hạn chế của chất dinh dưỡng, nếu một chất dinh dưỡng thiết yếu bị thiếu hụt nghiêm trọng thì sự sinh trưởng sẽ chậm lại. Pha cân bằng của chủng T.polyzona HUIBF21 kéo dài trong 3 ngày, sang đến ngày thứ 15, kết thúc
pha cân bằng, sinh trưởng của chủng giảm còn 183,09 mg và bước vào pha suy vong. Lúc này việc tiêu hao chất dinh dưỡng và việc tích lũy các chất thải độc hại làm tổn thất đến môi trường sống của vi sinh vật, làm cho số lượng tế bào sống giảm xuống. Kết quả này hoàn toàn phù hợp với lý thuyết về sinh trưởng của vi sinh vật (Lân et al., 2010)
3.2.2. Đường cong tích lũy enzyme ngoại bào
Để xây dựng đường cong tích lũy enzyme ngoại bào của chủng nấm T.polyzona
HUIBF21, tiến hành nuôi cấy lỏng trong môi trường sinh tổng hợp laccase BSM bổ sung 10% D-glucose ở 30°C, lắc 180 vòng/phút. Kết quả theo dõi sau 15 ngày ni được thể hiện ở hình 3.9
Hình 3.9. Đường cong tích lũy enzyme của chủng T.polyzona HUIBF21 trong 15 ngày.
Kết quả nghiên cứu cho thấy sau 3 ngày đầu nuôi cấy, hoạt độ laccase xác định được là 213 U/ml ± 0.46 do ở thời điểm này chủng đang phải trải qua q trình thích nghi với mơi trường, quá trình trao đổi chất diễn ra chậm.
Từ ngày 6 đến ngày 9, chủng ni đã dần thích nghi với mơi trường, mặc dù lượng sinh khối tăng không nhiều (kết quả thể hiện ở đường cong sinh trưởng) quá trình tổng hợp enzyme tăng hơn 3 ngày đầu và hoạt độ thu được lần lượt đạt 246,6389 U/ml ± 0.41 và 296,5278 U/ml ± 0.52. Điều này cũng có thể cho thấy laccase từ chủng nấm nghiên cứu là enzyme được tổng hợp ở pha sớm của quá trình sinh trưởng.
Ở những ngày theo dõi tiếp theo, hoạt độ laccase tiếp tục tăng nhanh cùng với quá trình phát triển sinh khối tế bào và đạt ngưỡng cao nhất ở 12 (đầu pha cân bằng) ngày nuôi do gặp điều kiện ni cấy thích hợp sinh khối tế bào tăng nhanh, các hoạt động trao đổi chất diễn ra thuận lợi nên lượng enzyme tổng hợp được nhiều, hoạt độ enzyme xác định được ở thời điểm này là 434,0278 U/ml ± 0.23.
trưởng của chủng nấm có mối quan hệ mật thiết với khả năng tích lũy enzyme ngoại bào của chủng T.polyzona HUIBF21. Kết quả này được dùng cho các thí nghiệm tiếp theo.