Thiết bị Số lượng Thiết bị Số lượng
Máy đo UV – VIS 1 Bếp điện bình cầu 1
Máy cô quay chân không 1 Máy sắc khí phổ GC/MS 1
Cân phân tích (0.0001g) 1 Tủ sấy 1
Lò nung 1 Nồi hấp khử trùng 1
Máy xay 1 Máy đo pH 1
Máy ly tâm 1
b) Hóa chất
- Cồn 96o
- Dimethyl sulfoxit (DMSO)
- Dung dịch Folin - Ciocalteu - TSB - Ampicillin - BaCl2 - Na2CO3 10% - FeCl3 5% - Acid gallic - Agar - Tetracylin - MHA - MHB - MP - H2SO4 - Amonia 2.1.3. Vi khuẩn thí nghiệm
Các chủng vi khuẩn dùng trong thí nghiệm có nguồn gốc tại trường Đại Học Công Nghiệp, Thành Phố Hồ Chí Minh. Chủng Staphylococcus aureus Chủng Escherichia coli Chủng Salmonella spp Chủng Bacilus cereus Chủng Pseudomonas aeruginosa
2.1.4. Các phương pháp nghiên cứu [3]
- Nghiên cứu lý thuyết: nghiên cứu các hợp chất tự nhiên, tổng quan các tài liệu vềđặc
điểm hình thái thực vật, thành phần hóa học, ứng dụng của lá ổi non. - Các phương pháp nghiên cứu thực nghiệm:
Nghiên cứu chiết tách dịch chiếtbằng phương pháp soxhlet với các điều kiện khảo sát là tỉ lệ nguyên liệu/dung môi và thời gian chiết.
Nghiên cứu phương pháp trọng lượng: xác định độ ẩm, hàm lượng tro của lá ổi
Nghiên cứu thành phần hóa học chính trong cao chiếtlá ổi non bằng phương pháp sắc ký khí khối phổ GC/MS.
Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn bằng phương pháp thử hoạt tính ức chế vi khuẩn bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch.
2.2. Xử lý nguyên liệu
Cây ổi lấy toàn bộ lá vừa và non. Chọn những lá tươi, không bị sâu bệnh, nấm mốc.
Đem đi rửa sạch phần bị bẩn, sấy ở nhiệt độ 60oC tới cho đến khi mẫu khô giòn, có khối lượng không đổi.
Hình 2.2. Lá ổi sấy khô và sau khi được xay nhỏ 0.5 – 1cm 2.3. Đề xuất quy trình chiết cao từ lá ổi non 2.3. Đề xuất quy trình chiết cao từ lá ổi non
Sơ đồ 2.1. Quy trình đề xuất chiết cao từ lá ổi non 2.3.2. Thuyết minh quy trình 2.3.2. Thuyết minh quy trình
- Bước 1: Lá ổi (vừa và non) sau khi được thu hái loại bỏ những lá sâu, đem đi rửa sạch loại bỏ bẩn, rồi sấy ở nhiệt độ 60oC tới nhiệt độkhông đổi. Xay nhỏ 0.5 – 1 cm rồi cân chính xác 10 g (± 0,1 g). Chuyển toàn bộ nguyên liệu đã được xử lý cho vào túi lọc (10 x 5 cm).
- Bước 2: Chuyển toàn bộ nguyên liệu đã được xử lý cho vào túi lọc (10 x 5 cm). Đong
250 ml cồn 96 cho vào bình cầu 2 cổ và lắp hệ thống chiết soxhlet. Đun nguyên liệu trong 120 phút , ở nhiệt độ 78oC.
- Bước 3: Dịch trích sau đó được lọc, cô quay đuổi dung môi hoàn toàn, thu được cao. Cao lá ổi non được bảo quản trong lọ thủy tinh đậy kín ở 4oC, tránh ánh sáng.
- Bước 4: Đem cao chiết đi phân tích GC/MS để xác định thành phần hóa học và thử
hoạt tính sinh học trên khuẩn E.Coli, Bacilus cereus, Staphylococcus aureus, Salmonella spp và Pseudomonas aeruginosa.
Chiết bằng phương pháp
soxhlet
Cao chiết thô
Khảo sát tỷ lệ dung môi/nguyên liệu tối ưu:
1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45 và 1:50 g/ml Xác định một số chỉ tiêu hóa lý: độ ẩm, hàm lượng tro Khảo sát yếu tốảnh hưởng đến quá trình chiết: nhiệt độ Xác định thành phần hóa học bằng phương pháp GC/MS Nguyên liệu Thử hoạt tính kháng khuẩn Cô quay Dịch chiết Xử lý Sấy khô, xay nhỏ
Khảo sát thời gian chiết tối ưu: 60 phút, 90
phút, 120 phút, 150 phút, 180 phút và 210 phút
2.4. Đề xuất mô hình chưng cất thực nghiệm tại phòng thí nghiệm
Hình 2.3. Mô hình chiết cao lá ổi non tại phòng thí nghiệm 2.5. Các phương pháp xác định một số chỉ tiêu hóa lý [1] 2.5. Các phương pháp xác định một số chỉ tiêu hóa lý [1]
2.5.1. Xác định độ ẩm
- Chuẩn bị 3 chén sứ đã đánh số, rửa sạch, tráng lại bằng nước cất, sấy khô đến khối lượng không đổi. Sau đó, cân lấy trọng lượng m1 (g).
- Cân khoảng 3g lá ổi non (đã được xử lý) cho vào chén sứ đã chuẩn bị sẵn ta có m2 (g).
- Đem sấy ở nhiệt độ 100oC, cứ sau 2h lấy ra để trong bình hút ẩm cho nguội rồi cân, làm như vậy cho đến khi khối lượng mẫu và chén sứ xem như không đổi kết quả m3 (g).
- Công thức tính độ ẩm:
Độẩm của mỗi mẫu:
(%) = (𝑚1+ 𝑚2)− 𝑚3
Độẩm trung bình:
TB(%) = ∑𝑛1(%) 𝑛
Trong đó: m1: trọnglượng chén sứ (g)
m2: trọnglượng lá ổi non (g)
m3: trọng lượng cốc sứ và mẫu sau khi sấy (g) n: số lần xác định (%).
2.5.2.Xác định hàm lượng trobằng phương pháp tro hóa mẫu
- Các mẫu lá ổi non (m3) đã xác định độ ẩm ở trên tiếp tục được sử dụng để hóa tro. Các mẫu được cho vào lò nung và tiến hành tro hóa mẫu ở nhiệt độ 600oC trong thời gian từ 6h, cho đến khi thu được tro màu xám trắng. Lấy mẫu ra làm nguội đến nhiệt độ phòng trong bình hút ẩm, cân lại mẫu đến khối lượng không đổi, có khối lượng
m4.
- Công thức tính hàm lượng tro:
Hàm lượng tro của mỗi mẫu:
% tro = 𝑚4− 𝑚1
𝑚2 x 100%
Hàm lượng tro trung bình:
% tro trung bình = ∑ 𝑡𝑟𝑜𝑛1 𝑛
Trong đó: m1: khối lượng chén sứ (g)
m2: khối lượng lá ổi non ban đầu (g)
m3: khối lượng cốc sứ và mẫu sau khi tro hóa (g)
n: số lần xác định % tro
2.6. Khảo sát điều kiện chiết
- Khi nghiên cứu về chiết tách dịch chiết từ lá ổi non bằng phương pháp chiết soxhlet, các yếu tố đầu tiên cần phải nghiên cứu là tỷ lệ nguyên liệu/dung môi và thời gian chiết. Đó là các yếu tốảnh hưởng trực tiếp đến lượng dịch chiết thu được.