b) Bacillus cereus
- Bacillus cereus là loài vi khuẩn hiếu khí, bào tử dạng hình ovan, có khảnăng sinh nha bào, được phát hiện đầu tiên trong một ca nhiễm độc thực phẩm vào năm 1955.
cereus được phát hiện và báo cáo chiếm khoảng 2 % số ca bệnh thực phẩm, trên thực tế con số này lớn hơn rất nhiều.
- Đặc điểm: Bacillius cereus là vi khuẩn Gram dương khi chưa trưởng thành nhưng có
thể thành Gram âm khi chúng già, kích thước 0,5 – 1,5 x 2 – 4 µ có hình que, sinh
bào tử, kị khí, có khắp nơi trong tự nhiên.Vi khuẩn không tạogiáp mô, không có khả
năngdi động.
- Vi khuẩn Bacillus cereus là một trong những nguyên nhân gây ra hiện tượng ngộđộc thực phẩm, trong khi một số chủnglại có lợi cho hệ vi sinh vật đường ruột của động vật.
Hình 1.8. Khuẩn lạc B. cereus trên đĩa thạch máu cừu. 1.3.2. Nhóm vi khuẩn Gram âm (Gr-)
a) Pseudomonas aeruginosa
- Trực khuẩn mủ xanh Pseudomonas aeruginosa còn có tên là Pseudomonas
pyocyaneus, Bacterium pyocyaneum, thuộc họ Pseudomonadaceae, giống
Pseudomonas. Là một vi khuẩn có độc lực thấp, gây bệnh có tính cơ hội, thường tìm thấy trong quá trình mưng mủ ở bò, heo và trong vết thương nhiễm trùng ở người (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977).
- Đặc điểm:
P. aeruginosa thuộc họ vi khuẩn hiếu khí, một trực khuẩn hình gậy, kích
thước 1,5 – 3 µm, thỉnh thoảng có dạng hình sợi hay hình dấu phẩy, di động, có 1
– 3 lông ở đầu. Đứng riêng từng đơn vị hay từng đôi, từng chuỗi ngắn. Vi khuẩn
không hình thành nha bào, giáp mô, khi nhuộm bắt màu Gram âm.
P. aeruginosa cho kết quả kiểm tra O-F (Oxidation Fermentation) là dương/âm,
tan chảy gelatin, khử nitrate…Không lên men đường glucose, không sinh indol,
phản ứng VP (Voges Proskauer) âm tính, không hoàn nguyên methyl red, không
có lysindecarbboxylase, kiềm hóa sữa.
- Sức đề kháng:
Pseudomonas aeruginosa ở một số chủng có khả năng tiết ra alginate bao bọc bên ngoài tế bào của vi khuẩn giúp vi khuẩn chống lại sự thực bào, tác dụng của các bạch cầu trung tính, kháng thể và các yếu tốngưng kết bổ thể.
Các protease được Pseudomonas aeruginosa tiết ra có khảnăng tách rời các thành phần của IgG, bất hoạt bổ thể (Ryan và Ray, 2004).
- Tính kháng thuốc:
Pseudomonas aeruginosa có được tính kháng thuốc cao là do cấu tạo của màng tế bào có lipopolysaccharide làm giảm khả năng thấm của kháng sinh vào bên trong tế bào vi khuẩn, một yếu tố khác là Pseudomonas aeruginosa có mang plasmid-R có khảnăng truyền gen kháng thuốc qua trung gian plasmid.
Theo G. Bonfiglo et al. (1998) Pseudomonas aeruginosa kháng một số kháng sinh
theo tỉ lệ như sau: meropenem 9,1 %, ceftazidime 13,4 %, carbenicillin 27,3 %,
ticarcillin/ clavulanic acid 22,8 %, amikacin 10,6 % và ciprofloxacin 31,9 %.
Theo Hoàng Kim Tuyến và ctv (2005), Pseudomonas aeruginosa kháng mạnh
cefoperazone và nhóm aminoglycoside (65 – 70 %). Kháng sinh thông dụng như
cefazidime cũng chỉ còn nhạy cảm khoảng 50 %.
- Tính gây bệnh:
Trong phòng thí nghiệm: vi khuẩn không có độc lực cao với động vật thí nghiệm. Thỏ và chuột bạch có thể chết do bại huyết, chuột lang có thể hoại tử hoặc hoại
thư sau khi tiêm vi khuẩn dưới da (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977)
Trên động vật: Vi khuẩn gây bệnh cho nhiều loài vật như bệnh viêm teo mũi, viêm
tử cung ở bò, chứng chảy nước ở tai chó mèo, nhiễm trùng máu ở gà (Carter, 1978).
Ngoài ra Pseudomonas aeruginosa còn gây bệnh viêm loét dạ dày trên rắn, viêm
phổi và viêm dạ dày ở2 loài trăn Nam Mỹvà 1 loài trăn ởẤn Độ.
Pseudomonas aeruginosa gây bệnh khi sức đề kháng cơ thể yếu như: viêm
phế quản, viêm màng não, viêm đường tiết niệu, viêm tai giữa, viêm loét trên da, viêm mắt, nhiễm trùng máu, giảm bạch cầu trung tính, tiểu đường (Trần Linh
Hình 1.9. Nuôi cấy vi khuẩn Pseudomonas aeruginosatrên đĩa thạch Xylo Lysine Sodium Deoxycholate (XLD)
b) Salmonella spp
- Salmonella spp là vi khuẩn đường ruột, Gram âm, thuộc họ Enterobacteriaceae.
Những chủng vi khuẩn này phân bố rộng rãi trong môi trường, có thể tìm thấy trong
đất, nước, thực phẩm và đường ruột của người và súc vật (Marcel Dekker, 2001).
- Năm 1934, theo đề nghị của hội sinh vật học quốc tếđể kỉ niệm người đầu tiên tìm ra vi khuẩn, tên chính thức của vi khuẩn này được đặt là: Salmonella (Nguyễn Như
Thanh và ctv, 1997).
- Đặc điểm:
Salmonella là trực khuẩn Gram âm, hình gậy ngắn, hai đầu tròn, kích thước 0,4 –
0,6 x 1 – 3 µm, không hình thàn nha bào và giáp mô. Phần lớn các loài thuộc giống Salmonella có thểdi động mạnh do thân trên có lông (7 –12 lông xung quanh thân),
trừ Salmonella gallinarum, Salmonella pullorum. (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977).
Salmonella là vi khuẩn hiếu khí và kị khí tùy nghi, dễ nuôi cấy, nhiệt độ thích hợp là 37oC nhưng vẫn có thể phát triển ở nhiệt độ 6 – 42oC, pH thích hợp 7,2 – 7,6 (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977). Khuẩn lạc tròn, trong sáng hoặc xám, nhẵn bóng hơi
lồi lên ở giữa, nhỏ và trắng hơn khuẩn lạc của Escherichia coli (đường kính 1 –1,5
mm) (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997).
Theo Trần Linh Thước (2006), phần lớn các loài Salmonella có đặc điểm:lên men
sinh hơi glucose và manitol nhưng không lên men đường lactose và succharose,
không sinh hơi indol, không phân giải urê, không có khảnăng tách nhóm amin từ
tryptophan, sinh H2S, khử nitrate thành nitrite (NO3- thành NO2-).
Salmonella khó sinh sản trong nước thường nhưng có thể tồn tại 1 tuần, trong nước
đá có thể sống 2 –3 tháng. Trong xác động vật chết chôn ở bùn hoặc cát khô có thể sống từ 2 – 3 tháng (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997).
Salmonella đề kháng yếu với nhiệt độ, ở nhiệt độ 60oC bị diệt trong 1 giờ, 70oC trong 20 phút, 75oC trong 5 phút. Có thể sinh trưởng trong môi trường thạch ở
nhiệt độ 10oC trong 115 ngày. Ánh sáng mặt trời chiếu thẳng có thể diệt vi khuẩn
trong nước trong 5 giờ, nước đục trong 9 giờ.
- Tính sinh độc tố:
Nội độc tố: rất mạnh, với liều thích hợp tiêm tĩnh mạch vi khuẩn có thể giết chết chuột bạch, chuột lang trong vòng 48 giờ với các triệu chứng: ruột non sung huyết phù nề, đôi khi hoại tử. độc tốgây độc thần kinh, gây hôn mê, co giật. Nội độc tố
có 2 loại: loại sung huyết và mụn loét.
Ngoại độc tố: tác động vào thần kinh và ruột, và chỉ hình thành trong điều kiện
invivo và trong môi trường nuôi cấy yếm khí (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997).
- Tính kháng thuốc:
Theo Bùi Thị Tho (2003), Salmonella có khảnăng đề kháng với các kháng sinh
sau: chloramphenicol (37,4 – 68,1%), tetracycline (33,4 – 59,6%), streptomycin (74,6-89,24%). Những kháng sinh dùng nhiều và rộng rãi thì tỷ lệ kháng thuốc cao
như: streptomycin, sulfonamid, chlortetracycline…
Năm 2001, tại Đồng Bằng Sông Cửu Long, Trần Thị Phận và ctv đã nghiên cứu về sự nhạy cảm đối với kháng sinh của 30 chủng Salmonella phổ biến và phát hiện
được các chủng kháng kháng sinh với tỷ lệ: ampicillin (54,5 %), chloramphenicol (36 %), tetracycline (36 %) và cephalexin (9 %).
Theo Natsue Ogasawara et al. (2001), giá trị MIC50 MIC90 của các chủng
Salmonella spp. được phân lập tại đồng bằng sông cửu long đối với oxytetracycline (MIC50 =2µg/ml và MIC90 = 128 µg/ml), streptomycin (MIC50 và MIC90 = 8 µg/ml), kanamaycin (MIC50 và MIC90 = 2 µg/ml), ampicillin (MIC50 =1 µg/ml và MIC90 = 2 µg/ml), cefazolin (MIC50 và MIC90 = 1 µg/ml).
- Tính gây bệnh:
Trên động vật vi khuẩn Salmonella gây bệnh thương hàn và phó thương hàn cho gia súc, gia cầm. Bình thường có thể phát hiện Salmonella trong ruột của bò, heo,
sút, vi khuẩn sẽ xâm nhập vào nội tạng và gây bệnh. Trâu bò đang cho sữa bị nhiễm
Salmonella thì lượng sữa sẽ giảm hoặc mất.
Trong phòng thí nghiệm, chuột bạch cảm nhiễm nhất. Ngoài ra, có thể dùng chuột lang hay thỏ. Sau khi tiêm vi khuẩn Salmonella vào dưới da hoặc phúc mạc thì ở
chỗ tiêm phát sinh thuỷ thủng, sưng, mưng mủ loét. Sau 4 – 5 ngày hoặc 8 – 10 ngày con vật gầy ốm dần rồi chết (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997).
Ngoài ra, Salmonella còn gây bệnh nhiễm trùng huyết ở bò cái đẻ và gây còi cọc
ởbò trưởng thành đang cho sữa (Sojka et al., 1974).
Hình 1.10. Hình ảnh của Salmonella spp kính hiển vi điện tử quét SEM
c) Escherichia coli
- Vi khuẩn Escherichia coli được phát hiện đầu tiên vào những năm 1885 với tên gọi
Bacterium coli commune từ các chủng vi khuẩn đường ruột. Escherichia coli thuộc họ Enterobacteriaceae, loài Escherichia (Đào Trọng Đạt và ctv, 1999).
- Đặc điểm: Theo Nguyễn Như Thanh và ctv (1997), Escherichia coli là một trực
khuẩn hình gậy, ngắn, kích thước 2 – 3 µ x 6 µ. Trong cơ thể có hình cầu trực khuẩn,
đứng riêng lẻ, đôi khi xếp thành chuỗi ngắn. Phần lớn Escherichia coli di động do có lông ở xung quanh thân, nhưng một số không thấy di động, không sinh nha bào, có thể có giáp mô. Escherichia coli phát triển dễ dàng trên các môi trường nuôi cấy
thông thường, một số chủng có thể phát triển được ởmôi trường tổng hợp đơn giản.
- Sức đề kháng: Escherichia coli bị diệt ở nhiệt độ 55oC trong 1 giờ. Ở 60oC bị diệt
trong vòng 15 – 30 phút, chết ngay ở 100oC. Các chất sát trùng acid phenic, clorua thủy ngân (II), formon… có thể diệt Escherichia coli trong 5 phút. Escherichia coli
đề kháng với sự sấy khô (Nguyễn Vĩnh Phước, 1977).
Ngoại độc tố: Phá hủy thành niêm mạc, hấp thu qua đường bạch huyết gây hoại tử
và gây nhiễm độc thần kinh.
Nội độc tố: Phá hủy thành mạch máu, làm tăng huyết áp, gây ngộđộc thần kinh và biểu hiện nhiều triệu chứng khác
- Tính kháng thuốc:
Escherichia coli nhạy cảm tuyệt đối với ciprofloxacin, gentamycin, neomycin,
ofloxacin và kanamycin (100 %). Riêng đối với ampicillin là 86,67 % và bactrim
là 80 % (Nguyễn Ngọc Thanh Hà, 2004).
Tuy nhiên, theo Phan Trọng Hổ và ctv (2001) thì Escherichia coli đề kháng cao
với chloraphenicol (86,79 %), penicillin (83,02 %). Kháng thấp với neomycin (11,32 %), polymycin B (13,21 %), furazolidon (15,09 %).
- Tính gây bệnh:
Hầu hết các loài gia súc, gia cầm, chim muông, bò sát đều có thể cảm nhiễm Escherichia coli (Đào Trọng Đạt và ctv, 2001).
Theo Nguyễn Như Thanh và ctv (1997), Escherichia coli có sẵn trong ruột
động vật nhưng chỉcó tác động gây bệnh khi sức đềkháng trong cơ thể con vật giảm (do chăm sóc, nuôi dưỡng, do cảm lạnh hoặc cảm nắng).
Người ta thường gọi Colibacillosis là một bệnh đường ruột của ngựa, bê, cừu, heo và gia cầm non do Escherichia coli gây ra.
Hình 1.11. Ảnh vi điện tửở nhiệt độ thấp của một nhóm vi khuẩn E.coli, được phóng đại 10.000 lần.
1.4. Một số bài báo nghiên cứu khoa học về cây ổi
1. Nguyễn Vân Anh. “So sánh hoạt tính kháng khuẩn của lá 4 nhóm ổi ruột đỏ (Psidium Guajava L.)”. Cần Thơ –năm 2012.
- Bốn nhóm Ổi Ruột Đỏ (Psidium gaujava) được trồng cùng điều kiện (nhiệt độ, ánh
sáng, dinh dưỡng,…) được tiến hành chiết xuất với methanol bằng phương pháp ngâm để thu được cao ổi.
- Kết quả:
Cao lá 4 nhóm ORD có hoạt tính kháng khuẩn tốt trên tất cả chủng vi khuẩn thử
nghiệm và mạnh nhất trên vi khuẩn Staphylococcus aureus (32 µg/ml ≤ MIC ≤ 128 µg/ml), đây là vi khuẩn gây bệnh phổ biến trên gia súc gia cầm và con người,
có khảnăng đề kháng cao với các kháng sinh nhóm -lactams và là nguyên nhân
gây viêm vú ở bò sữa, viêm da có mủ ở chó (Nguyễn Như Thanh và ctv, 1997;
Lưu Hữu Mãnh, 2009).
Cao lá ORD cũng có hoạt tính kháng khuẩn tốt trên P. aeruginosa (MIC =
512 µg/ml), đây là vi khuẩn có khả năng mạnh với cefoperazone và nhóm
aminoglycoside (Hoàng Kim Tuyến và ctv, 2005), và là nguyên nhân gây bệnh cho
nhiều loài vật như: viêm teo mũi, viêm tử cung ở bò, chứng chảy nước mũi ở tai chó mèo, nhiễm trùng máu ở gà (Carter, 1978).
2. Nguyễn Thành Lộc. “Báo cáo nghiên cứu dược liệu cây ổi (Psidium Guajava L.)”. Cần Thơ –năm 2018.
- Kết quả: Vềđịnh tính: đã chỉra được nhiều thành phần có trong có trong dược liệu
ổi như: tinh dầu, flavonoid, tannin, chất béo,… Ngoài ra sau khi khảo sát hệ dung môi khác nhau với nhiều tỉ lệ khác nhau thì nhận thấy rằng hệ dung môi: chloroform –
ethyl acetat –acid formic (5:5:1) cho được vết tách rõ và đẹp nhất khi chấm sắc ký.
3. Nguyễn Thị Ngọc Lan. “Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học các hợp chất trong lá ổi non (Psidium Guajava L)”.
- Tiến hành ngâm lá ổi non trong các dung môi khác nhau n-hexan, chloroform, etylaxetat, cồn tuyệt đối trong 3 ngày. Sau đó pha loãng đem đo UV – VIS để xác
định dung môi tối ưu.
- Kết quả: Bằng cảm quan thì thấy dịch chiết trong dung môi cồn tuyệt đối cho màu xanh đậm và theo kết quả đo UV-VIS ở bảng 1.2 thì mật độ quang của dịch chiết trong dung môi cồn tuyệt đối là lớn nhất. Do đó cồn tuyệt đối là dung môi tối ưu để
Bảng 1.2. Màu sắc và mật độ quang của các dịch chiết ngâm trong các dung môi khác nhau
STT Tên dung môi Màu sắc Mật độ quang
1 n-hexan Vàng nhạt 0.1814 2 Chloroform Vàng xanh 0.3046 3 Etyl acetat Xanh nhạt 2.5914
4 Cồn tuyệt đối Xanh đậm 2.6128 1.4.2. Bài báo nghiên cứu khoa học ngoài nước [13],[14]
1. “Antimicrobial Activities of Leaf Extracts of Guava (Psidium guajava L) on Two Gram-Negative and Gram-Positive Bacteria”, International Journal of Microbiology Volume 2013.
- Kết quả:
Chứng minh tiềm năng kháng khuẩn của chiết xuất lá Psidium guajava bằng cách sử dụng các dung môi khác nhau. Kết quả chỉ ra rằng ethanol và metanol tốt hơn
n-hexane và nước để chiết xuất các đặc tính kháng khuẩn của lá ổi.
Cũng chỉ ra rằng chất chiết xuất từ lá ổi không có tác dụng kháng khuẩn đối với vi khuẩn gram âm, cho thấy chúng không chứa các hoạt chất chống lại các sinh vật. Sự ức chế quan sát được của vi khuẩn gram dương, Bacillus cereus và Staphylococcus aureus, cho thấy rằng ổi có các hợp chất chứa các đặc tính kháng khuẩn có thểngăn chặn sựtăng trưởng khi chiết xuất bằng cách sử dụng metanol hoặc ethanol làm dung môi.
2. “Chemical Components and Bioactivities of Psidium guajava”, International Journal of Food Nutrition and Safety, 2014.
- Cây Psidium guajavađã thu hút sự chú ý cho chất chống oxy hóa của nó tiềm năng. Khảnăng chống oxy hóa của chiết xuất quảổi đã được đánh giá bằng các xét nghiệm
chống oxy hóa in vitro khác nhau (ABTS, DPPH và FRAP) (Martinez và cộng sự,
2012)
- Kết quả:
Psidium guajava chiết xuất từ vỏ trái cây có khảnăng làm giảm căng thẳng oxy hóa của tuyến tụy ở chuột bị tiểu đường streptozotocin gây ra (45 mg/kg). Kết quả
cho thấy dịch chiết nước Bổ sung vỏ trái cây Psidium guajava có thể làm giảm malondialdehyd (MDA) và protein carbonyl mức độ và hoạt động của mức độ
superoxide effutase (SOD) và glutathione (GSH) cao hơn (Budin et al., 2013).
Tác dụng hạđường huyết của ổi cũng liên quan đến khảnăng chống oxy hóa của nó hoạt động (Huang và cộng sự, 2011). Bổ sung ổi hồng có thể làm giảm peroxid
hóa lipid và tăng hoạt động của enzyme chống oxy hóa như catalase, superoxide
effutase, glutathione peroxidase và glutathione reductase trong máu chuột tăng
huyết áp tự phát (Nor và Yatim, 2011).
1.5. Các phương pháp kỹ thuật [3],[4]1.5.1. Phương pháp phân tích khối lượng 1.5.1. Phương pháp phân tích khối lượng
- Phương pháp phân tích khối lượng là phương pháp phân tích định lượng dựa vào kết quả cân của khối lượng một chất tinh khiết hay ở dạng đơn chất có trong mẫu cần phân tích.
- Nguyên tắc:
Chất cần phân tích được tách ra khỏi mẫu ở dạng hợp chất kết tủa
Kết tủa được lọc, rửa sạch, sấy khô đến khối lượng không đổi để chuyển thành dạng có công thức hóa học xác định (gọi là dạng cân)
Cân chính xác khối lượng dạng cân, dùng khối lượng và công thức hóa của dạng
cân đểtính hàm lượng chất cần phân tích
Hình 1.12. Cân phân tích
Có độ chính xác cao (0.01%)
Đơn giản về nguyên tắc, dụng cụphân tích thông thường