Gà ta lai là giống gà đƣợc lai giữa con D308 và trống ta của Việt Nam, hai giống gà này lai với nhau tạo ƣu điểm vƣợt trội nhƣ: lông ốp, mào cờ, lông màu đỏ tía, chân vàng, da vàng, lông đuôi dài, thịt săn chắc, thơm ngon, tăng trƣởng
nhanh. Gà ta lai đang là giống gà đƣợc nhiều hộ chăn nuôi ƣa chuộng vì nó mang lại hiệu quả kinh tế cao. Gà ta lai có sức đề kháng tốt nhƣ: chịu rét tốt, ít bị bệnh tật, dễ nuôi. Ngoài ra, gà ta lai còn phù hợp với hai kiểu nuôi công nghiệp và thả vƣờn. Chính vì thế, gà ta lai rất phù hợp với điều kiện tự nhiên và hình thức chăn nuôi ở nƣớc ta nên khả năng mắc các bệnh trên đƣờng hô hấp đặc biệt là bệnh do ORT ít hơn so với các giống gà khác.
4.1.6. Kết quả nghiên cứu triệu chứng sàng trên đàn gà ắc ORT
Trong thời gian tiến hành đề tài nghiên cứu c n đƣợc sự giúp đỡ của Trạm thú y các huyện Tân Yên, Yên Dũng, Hiệp Hòa chúng tôi đã thu thập đƣợc tổng cộng 50 con gà mắc ORT (bảng 4.6).
Bảng 4.6. Kết quả thu thập gà mắc bệnh do ORT tại một số huyện t n địa bàn tỉnh T T Nguồn gốc m u Số ƣợng m u (con) Tiêm phòng vắc xin Ghi chú 1
Tân Yên 18 Chƣa tiêm ph ng
ORT
9 gà 1-6 tuần tuổi; 6 gà thịt; 3 gà đẻ
2
Yên Dũng 17 Chƣa tiêm ph ng
ORT
7 gà 1-6 tuần tuổi; 4 gà thịt; 6 gà đẻ
3
Hiệp Hòa 15 Chƣa tiêm ph ng
ORT
5 gà 1-6 tuần tuổi; 6 gà thịt; 4 gà đẻ
Tổng 50
Kết quả bảng 4.6 cho thấy ở các huyện khác nhau thì số lƣợng mẫu thu thập đƣợc cũng khác nhau. Tuy nhiên hầu hết các huyện trên địa bàn tỉnh đều chƣa tiêm ph ng vắc xin phòng bệnh do ORT. các lứa tuổi khác nhau thì số mẫu thu thập đƣợc cũng khác nhau, trong tổng số 50 mẫu (con) thu thập đƣợc 21 con ở độ tuổi 0-6 tuần trong đ Tân Yên 9 con, Yên Dũng 7 con, Hiệp Hòa 5 con), 16 gà thịt trong đ Tân Yên 6 con, Yên Dũng 4 con, Hiệp Hòa 6 con và 13 gà đẻ (Tân Yên 3 con, Yên Dũng 6 con, Hiệp Hòa 4 con).
Nhìn vào hình 4.7 ta thấy trên c ng địa bàn tỉnh nhƣng các huyện khác nhau c lƣợng mẫu thu thập khác nhau.
18 17 15 13 14 15 16 17 18
Tân Yên Yên Dũng Hiệp H a Nguồn gốc u huyện Số ƣợng u con
Hình 4.7. Kết quả mẫu bệnh ở một số huyện t n địa bàn tỉnh
Theo dõi các triệu chứng lâm sàng của gà mắc bệnh do ORT trên đàn gà nuôi tại địa bàn tỉnh Bắc Giang, chúng tôi thu đƣợc kết quả thể hiện thông qua bảng 4.7.
Bảng 4.7. Triệu chứng lâm sàng của gà mắc bệnh do ORT
STT Nhóm gà Số ƣợng con T lệ (%) Triệu chứng
1 1-6 tuần
tuổi 21 42
Sốt; ủ rũ; giảm hoặc bỏ ăn; kh thở; phân loãng; mặt sƣng, phù; gầy, lông xơ xác; mũi có nhớt; chậm lớn.
2 Gà thịt 16 32
Sốt; ủ rũ; giảm hoặc bỏ ăn; kh thở; gầy, lông xơ xác; mặt sƣng, ph ; phân loãng; miệng, mũi c dịch nhớt; giảm tăng trọng.
3 Gà đẻ 13 26
Sốt; ủ rũ; giảm hoặc bỏ ăn; kh thở; gầy, lông xơ xác; tỷ lệ đẻ giảm, trứng méo mó; miệng, mũi c dịch nhớt.
Bảng 4.7 cho thấy: tổng số 50 con gà mắc bệnh do ORT thu thập đƣợc có 21 con ở độ tuổi 1-6 tuần tuổi, chiếm tỷ lệ 42% (21 con trên tổng số 50 con theo dõi). Tiếp theo là gà thịt có 16 con chiếm tỷ lệ 32% (16 con trên tổng số 50 con theo d i và gà đẻ chiếm tỷ lệ thấp nhất 26% (13 con trên tổng số 50 con theo dõi).
Tuy các lứa tuổi khác nhau nhƣng triệu chứng lâm sàng là tƣơng đối giống nhau: con vật sốt, khó thở, giảm hoặc bỏ ăn; con vật gầy, lông xơ xác; mũi, miệng đều có dịch nhớt; mặt phù; phân loãng, màu trắng hoặc màu cà phê. Đối với gà đẻ: tỷ lệ đẻ giảm, trứng m o m . Đối với gà thịt và gà 1-6 tuần tuổi ảnh hƣởng đến quá trình sinh trƣởng, gà tăng trọng chậm.
42 32 26 0 10 20 30 40 50 1-6 tuần tuổi Gà thịt Gà đẻ Nhóm gà T ệ %
Hình 4.8. Triệu chứng lâm sàng của gà mắc ORT
Nhìn vào hình 4.8 có thể nhận thấy đƣợc nhóm gà ở giai đoạn 1-6 tuần tuổi có tỷ lệ mắc bệnh do ORT cao nhất chiếm 42% tổng lƣợng mẫu thu thập và thấp nhất là nh m gà đẻ với tỷ lệ 26%. Còn tỷ lệ mắc ở nhóm gà thịt chiếm 32% mẫu thu thập.
Gà ủ rũ, lông x , vƣơn cổ lên thở
ũi bị viêm, có dịch nhớt Phân loãng, dịch viêm
Tiến hành mổ khám và quan sát bệnh tích đại thể; tổng hợp kết quả mổ khám chúng tôi thu đƣợc bảng 4.8.
Bảng 4.8. Kết quả mổ khám kiểm tra bệnh tí h đại thể của gà mắc ORT (n=50)
STT Cơ qu n theo dõi Số m u biến đổi T lệ (%)
1 Xuất huyết khí quản 32 64
2 Khí quản có dịch nhày 36 72
3 Khí quản gốc có cục mủ 26 52
4 Phổi viêm đỏ sẫm 37 74
5 Phổi viêm hóa mủ 21 42
6 Phổi viêm phủ tơ huyết 16 32
7 Túi khí dày đục có fibrin 35 70
8 Phủ tơ huyết ở gan, ruột 15 30
9 Thận tụ máu 19 38
10 Gan sƣng tụ máu 17 34
11 ách sƣng 11 22
12 Viêm khớp 9 18
13 Xoang bao tim tích nƣớc 8 16
Kết quả bảng 4.8 cho thấy: đa số các gà dƣơng tính với O. rhinotracheale
đều có biểu hiện tổn thƣơng đại thể chủ yếu ở đƣờng hô hấp. Trong tổng số 50 con gà mổ khám có tới 32 con có biểu hiện xuất huyết khí quản chiếm tới 64%; 36 con có biểu hiện khí quản có dịch nhày chiếm 72%; 26 con có biểu hiện khí quản viêm, có dịch nhầy bao quanh, niêm mạc khí quản viêm đỏ, mổ khám thấy có cục mủ chắn ngang khí quản, tỷ lệ này chiếm tới 52%.
Tất cả số gà mổ khám đều có biểu hiện viêm phổi: phổi viêm đỏ sẫm chiếm tỷ lệ 74%, phổi viêm phủ tơ huyết chiếm 32%. Phổi viêm, xuất huyết. Khi dùng kéo cắt ngang phổi thấy có cục mủ cứng bít kín những nhánh phế quản làm cho gà khó thở, lúc nào cũng phải ngáp. Tỷ lệ này chiếm 42% trong tổng số gà mổ khám. Con số này cho thấy đa số gà bị nhiễm ORT đều có tổn thƣơng hô hấp nghiêm trọng dẫn đến hiện tƣợng khó thở, thở ngáp làm tăng tỷ lệ chết do thiếu Oxy ở gà bệnh. Túi khí dày lên, đục màu, thành túi khí tăng sinh. hi quan sát túi khí thấy độ trong túi khí bị biến đổi, có màu trắng đục hoặc vàng. Tần suất túi khí bị tăng sinh chiếm tới 70%. Tỷ lệ này dẫn tới sự thiếu hụt ô xy trong trao đổi khí ở gà.
khớp,... nhƣ: phủ tơ huyết ở gan, ruột chiếm tỷ lệ 30%; thận tụ máu chiếm 38%; gan sƣng tụ máu chiếm 34%; lách sƣng chiếm tỷ lệ 22%; viêm khớp chiếm 18% và xoang bao tim tích nƣớc chiếm tỷ lệ 16%.
Niêm mạc thanh khí quản viêm, phù nề, xuất huyết, phủ lớp màng nhày
Túi khí đục
Túi khí viêm, c bã đậu màu vàng đ ng cục Khí quản có mủ
4.1.7. Kết quả nuôi c y và phân lập vi khu n trên đàn gà bi u hiện triệu chứng lâm sàng mắc ORT
Sau khi giám định chính xác gà mắc bệnh do ORT bằng kỹ thuật PCR, chúng tôi đã tiến hành lấy mẫu bệnh ph m nuôi cấy trên môi trƣờng thạch máu Colombia Blood Agar (có bổ sung 5% máu thỏ và 10µg/ml Gentamicin), ở điều kiện 37oC, CO2 5% ủ trong thời gian 24-72 giờ để kiểm tra sự có mặt của vi khu n c trong cơ thể. Kết quả nuôi cấy đƣợc thể hiện thông qua hình 4.13.
Hình 4.11. Kết quả nuôi cấy vi khuẩn ORT t n ô t ƣờng thạch máu
Kết quả hình 4.11 cho thấy: trên môi trƣờng CBA (Columbia Blood Agar), khu n lạc phát triển thành những đám c kích thƣớc khác nhau, khu n lạc nhỏ, to bằng đầu đinh ghim, tr n, đục, c màu xám đến xám trắng hoặc gây dung huyết yếu hoặc không gây dung huyết. Kết quả này cũng ph hợp với các nghiên cứu trƣớc đây đã đƣợc công bố (Mohammed Zahra et al.; Võ Thị Trà An và cs, 2014).
Từ kết quả trên, chúng tôi tiến hành lấy khu n lạc đặc trƣng kiểm tra một số phản ứng sinh hóa của chúng (Oxidase, Catalase), kết quả đƣợc thể hiện thông qua hình 4.12.
Hình 4.12. Kết quả kiểm tra một số đặc tính sinh hóa của vi khuẩn ORT
Thông qua hình 4.12 chúng tôi nhận thấy: với những khu n lạc của vi khu n ORT trên môi trƣờng CBA cho kết quả nhƣ phản ứng Catalase âm tính (ORT không có men Catalase nên chúng không có khả năng phân hủy H2O2 tạo thành H2O và O2 vì vậy phản ứng không tạo bọt); phản ứng Oxidase dƣơng tính (phản ứng chuyển thành màu tím than). Kết quả này cũng ph hợp với các nghiên cứu trƣớc đây của (Mohammed Zahra et al.; Võ Thị Trà An và cs, 2014).
Chúng tôi tiếp tục lựa chọn những khu n lạc điển hình trên, tăng sinh trên môi trƣờng BHB, ủ 37oC trong thời gian 24 giờ, CO2 5%. Tiến hành lấy canh khu n trên thử phản ứng Indol, kết quả thu đƣợc thể hiện thông qua hình 4.13.
Hình 4.13. Kết quả kiểm tra phản ứn Indo đối với vi khuẩn ORT
Nhƣ vậy, phản ứng Indol cũng cho kết quả âm tính (kết quả này cũng ph hợp với nghiên cứu trƣớc đây longkorn monsin et al., 1997).
Để xác định hình thái của chủng vi khu n ORT phân lập đƣợc tại tỉnh Bắc Giang; chúng tôi tiến hành nhuộm gram theo quy trình hƣớng dẫn của nhà sản xuất.
Kết quả thu đƣợc đƣợc thể hiện thông qua hình 4.14.
Hình 4.14. Hình thái vi khuẩn ORT dƣới kính hiển vi
Kết quả hình 4.16 cho thấy: vi khu n ORT phân lập đƣợc là gram âm bắt màu đỏ và rất đa dạng khi kiểm tra trên kính hiển vi. ết quả này cũng ph hợp với nghiên cứu trƣớc đây khi cho rằng: ORT phân lập đƣợc là gram âm và đa dạng khi kiểm tra trên kính hiển vi Qing Pan et al., 2012).
Theo Nguyễn Thị an và cs 2014 nguồn chứa vi khu n ORT thƣờng c trong phổi, túi khí, chất tiết của đƣờng hô hấp nhƣ: nƣớc mũi, nƣớc mắt, dịch nhầy khí quản và ở hai bên phế quản của gia cầm mắc bệnh. hi thời tiết thay đổi đột ngột, mật độ nuôi quá cao, kh u phần ăn không đảm bảo vệ sinh, dụng cụ chăn nuôi không đảm bảo, hi những điều kiện bất lợi đ tấn công làm cho sức đề kháng của đàn gà giảm sút tạo điều kiện thuận lợi cho vi khu n phát triển và gây bệnh.
ầm bệnh sau khi xâm nhập vào đƣờng hô hấp chúng s sinh trƣởng và phát triển ở niêm mạc đƣờng hô hấp và nhanh ch ng tấn công đến cơ quan đích là phổi, gây ra các bệnh tích đặc trƣng là viêm phổi, viêm màng phổi, viêm túi khí, Trên cơ sở đ , để tìm hiểu vai tr gây bệnh của vi khu n này ở trên gà, chúng tôi đã tiến hành nuôi cấy phân lập vi khu n ORT từ các mẫu bệnh ph m khí quản, phổi, dịch swab, túi khí và gan, lấy từ 50 con gà ở mọi lứa tuổi c triệu chứng về
hô hấp mắc bệnh do ORT thu thập tại tỉnh Bắc Giang. Gà nghi nhiễm đƣợc đƣa về ph ng thí nghiệm trọng điểm công nghệ sinh học Thú y cụm II để tiến hành phân lập vi khu n 05 mẫu bệnh ph m/ 1 con . Bằng phƣơng pháp lấy mẫu và nuôi cấy, kết quả thu đƣợc sau 24-72 giờ nuôi trong tủ ấm và đƣợc trình bày ở bảng 4.9.
Bảng 4.9. Kết quả phân lập chủng vi khuẩn ORT từ mẫu bệnh phẩm
theo nhóm gà STT Nhóm gà M u bệnh ph m Số phân lập Số m u dƣơng tính T lệ (%) 1 1-6 tuần tuổi 21 105 91 86,67 2 Gà đẻ 16 80 66 82,50 3 Gà thịt 13 65 51 78,46 Tổng 50 250 208 83,20
Ghi chú: m i con gà lấy 5 loại bệnh ph m (khí quản, phổi, dịch swab, túi khí và tim)
Thông qua bảng 4.9 cho thấy: trong tổng số 250 mẫu đƣợc lựa chọn phân lập (m i con lựa chọn ra 5 cơ quan/bộ phận: khí quản, phổi, dịch swab, túi khí và tim) có 208 mẫu cho kết quả dƣơng tính, chiếm tỷ lệ 83,20%. Trong đ : gà 1-6 tuần tuổi chiếm tỷ lệ cao nhất 86,67% (91 mẫu dƣơng tính/ 105 mẫu phân lập); tiếp theo là gà đẻ chiếm tỷ lệ 82,50% (66 mẫu dƣơng tính/ 80 mẫu phân lập) và cuối cùng là gà thịt chiếm tỷ lệ thấp nhất 78,46% (51 mẫu dƣơng tính/ 65 mẫu phân lập). Kết quả đƣợc thể hiện qua hình 4.15
86,67 82,5 78,46 72 76 80 84 88 1-6 tuần tuổi Gà đẻ Gà thịt Nhóm gà T ệ u dƣơng tính (%)
Hình 4.15. Kết quả phân lập chủng vi khuẩn ORT từ mẫu bệnh phẩm theo nhóm gà
Để thấy r hơn tỷ lệ dƣơng tính với bệnh do ORT chúng tôi tiến hành so sánh tỷ lệ dƣơng tính trên các loại bệnh ph m khác nhau. đây việc so sánh đƣợc tiến hành trên 05 mẫu bệnh ph m, đƣợc phân lập từ m i con gà có triệu chứng, bệnh tích ORT trong tổng số 50 con. Kết quả đƣợc thể hiện qua bảng 4.10.
Bảng 4.10. Kết quả phân lập vi khuẩn ORT từ mẫu bệnh phẩm
STT Loại bệnh ph m Số m u ki m tra Kết quả phân lập Số m u dƣơng tính T lệ (%) 1 Phổi 50 50 100 2 Khí quản 50 50 100 3 Dịch Swab 50 47 94 4 Túi khí 50 45 90 5 Tim 50 16 32 Tổng 250 208 83,2
Kết quả ở bảng 4.10 cho thấy tỷ lệ phân lập đƣợc vi khu n ORT cao nhất ở phổi và khí quản (100%), tiếp theo đ là ở dịch swab (94%), túi khí (90%) và thấp nhất là ở tim (32%). Tỷ lệ phân lập bình quân ở 05 cơ quan trên là 83,2%. Kết quả này hoàn toàn phù hợp với cơ chế gây bệnh của vi khu n ORT, mầm bệnh xâm nhập theo đƣờng hô hấp, sinh trƣởng và phát triển ở niêm mạc đƣờng hô hấp sau đ đi đến phổi và gây ra hiện tƣợng viêm phổi, viêm màng phổi, viêm túi khí. Vì vậy, nên phổi, khí quản, túi khí, dịch swab có tỷ lệ phân lập cao hơn ở các cơ quan khác. Kết quả đƣợc thể hiện rõ qua hình 4.16
100 100 94 90 32 0 20 40 60 80 100
Phổi hí quản Dịch Swab Túi khí Tim oại bệnh ph
T ệ u dƣơng tính (%)
Theo các nghiên cứu vào năm 1981, lần đầu tiên ngƣời ta phân lập đƣợc một chủng ORT từ dịch nƣớc mũi, dịch phù ở mặt, mủ và tơ huyết trên túi khí viêm của gà tây nuôi tại phía Bắc nƣớc Đức.
Theo Du Preez thấy rằng đã phân lập đƣợc vi khu n ORT trên các đàn gà thịt thƣơng ph m tại Nam Phi có các biểu hiện về đƣờng hô hấp.
Bock et al., 1995 đã tìm thấy vi khu n trong mẫu bệnh ph m đƣờng hô hấp của gia cầm ở Israel.
Từ những kết quả nghiên cứu của các tác giả và của chúng tôi, có thể nhận xét gà mắc bệnh mang vi khu n ORT ở khí quản, túi khí, phổi, dịch swab với tỷ lệ rất cao và có mặt ở hầu hết các cơ quan nhƣng với tỷ lệ thấp hơn. ết quả nghiên cứu này còn một lần nữa khẳng định vai trò gây bệnh của vi khu n ORT trên gà tại Việt Nam. Kết quả phân lập đ c nghĩa chính xác trong ch n đoán, cho ph p xác định bệnh và nhanh chóng có biện pháp phòng và chữa trị hiệu quả bệnh do ORT, giảm thiệt hại kinh tế cho ngƣời chăn nuôi.
Từ các kết quả trên, chúng tôi đã lựa chọn ra các mẫu cho kết quả phân lập dƣơng tính, tiến hành chiết tách DNA của vi khu n ORT và tiến hành thực hiện phản ứng PCR với cặp mồi đặc hiệu để kiểm tra có hay không DNA của vi