Mặc dù tư liệu khoa học tổng kết rằng có hai cách tách protoplast. Đó là biện pháp cơ học và biện pháp men học. Nhưng trong thực tế, phương pháp men học có hiệu quả hơn rất nhiều phương pháp cơ học, phương pháp men học có thể tách được hàng gram protoplast. Các enzym được dùng là cellulase, pectinase hay hemicellulase hoàn toàn không độc hại đối với tế bào. Bởi vì thành tế bào có thành phần gồm pectin, cellulose, hemicellulose cho nên phải sử dụng hỗn hợp enzyme bao gồm:
Pectinase phá huỷ pectin. Cellulase phá huỷ cellulose.
Hemicellulase phá huỷ hemicellulose.
Ngoài ra, để protoplast không bị vỡ sau khi thành cellulose bị phá huỷ, người ta phải sử dụng những chất làm tăng áp suất thẩm thấu vào dung dịch enzyme. Thành phần dịch enzyme gồm có (theo Constabel, 1975):
- Pectinase - Cellulase - Hemicellulase - Sorbitol - Mannitol - CaCl2.2H2O - CaH4(PO4). 2H2O
Tuỳ theo từng đối tượng và từng loại mô mà thay đổi nồng độ cho thích hợp.
- Sau khi xử lý enzyme cellulas, protoplast được thu nhặt lại bằng máy ly
tâm, sau đó đem rửa sạch với môi trường không chứa men và cuối cùng protoplast chuyển sang dung dịch manitol:
- Tạo nhũ dịch protolast với mật độ l04 - l07/ml chất nguyên sinh được cấy trên đĩa trên môi trường mềm, hoặc trong môi trường lỏng:
- Sau khi cấy 5 - 10 ngày, chất nguyên sinh tổng hợp thành tế bào mới và bắt đầu phân chia. Trong giai đoạn này, khi tế bào phân chia, môi trường có thể được pha loãng với môi trường mới để duy trì sự sinh trưởng và phân chia của tế bào.
Vì protoplast thực chất là tế bào trần không có thành cho nên có thể tách
được từ nhiều nguồn khác nhau như các bộ phận của cây (chủ yếu là mesophyl của
lá, mô sẹo, tế bào đơn).