Trên phổ MS của chất 1 có peak ion m/z 427.3 [M+H]+ (100%), kết hợp với phổ NMR của chất 1, ta có thể xác định công thức phân tử của 1 là C30H50O. Dựa trên dữ liệu về phổ NMR và MS, kết hợp tham khảo tài liệu tham khảo [51], có thể khẳng định chất 1 là beta-amyrin, có công thức cấu tạo:
Hình 3.7. Công thức cấu tạo của chất 1
3.2.2. Phân tích cấu trúc hợp chất 2
Chất 2 được thực nghiệm đo các phổ NMR; phổ khối lượng (MS) và so sánh với tài liệu tham khảo để xác định công thức cấu tạo.
Hình 3.8. Phổ 1H-NMR của chất 2
Hợp chất 2 thu được dưới dạng bột màu trắng. Phổ 1H-NMR thấy xuất hiện tín hiệu của nhóm β-OH (δH 3.52, m, H-3). Trên phổ cộng hưởng proton
cũng xác nhận sự có mặt của liên đôi tại δH 5.35 (br d, 3.5). Ngoài ra còn có 2
tín hiệu cộng hưởng của 2 nguyên tử hydrogen khác tại 5.02 và 5.17 ppm của liên kết đối khác. Tín hiệu cộng hưởng của nhóm methyl ở vị trí C21 liên kết với nhóm methylen tại δH 0.69 (d, J = 9.2 Hz, 3H). Hai nhóm methyl ở vị trí 18 và 19 tại 0.99(s); và 0.82 ppm.
Phổ 13C-NMR của 2 xuất hiện 29 tín hiệu carbon, đặc biệt, tín hiệu của hai cặp olefin được xác nhận tại C-5 (δC 140.5)/C-6 (δC 121.76) và liên kết đôi tại C-
22 (δC 138.29)/C-23 (δC 129.28). Qua phổ HSQC, HMBC, NOESY xác nhận sự
quy kết các tín hiệu là phù hợp với stigmasterol [49, 80].
Dựa vào các phân tích trên và kết hợp so sánh số liệu phổ 1H , 13C- NMR của 2 với các số liệu đã được công bố của stigmasterol [49, 80] thấy hoàn toàn phù hợp. Như vậy, 2 có thểđược khẳng định là stigmasterol.
Hình 3.9. Phổ 13C-NMR của chất 2
Hình 3.11. Phổ HSQC của chất 2
Hình 3.12. Phổ HMBC của chất 2
Hình 3.14. Cấu trúc hóa học của chất 2
3.2.3. Phân tích cấu trúc hợp chất 3
Cấu trúc hóa học của chất 3 được xác định dựa và 1H-NMR, 13C-NMR, HSQC, HMBC và MS, kết hợp so sánh với các tài liệu tham khảo.
Hình 3.15. Phổ 1H-NMR của chất 3
Hợp chất 3 thu được dưới dạng bột màu vàng nhạt. Phổ 1H-NMR thấy xuất hiện tín hiệu cộng hưởng của các proton trong nhóm methyl trong nhóm methoxy (-OCH3) (δH 4.11ppm (s, 3H), 9-OCH3; δH 4.08 ppm (s, 3H), 10-OCH3). Hai nhóm methylen ở vị trí C-5 (δH 3.22 (t, J = 6.4 Hz, 2H) và C-6 (δH 4.95 (t, J = 6.4 Hz,
2H). Nhóm methylen tại C-2 có δH 6.18 ppm (s, 2H) liên kết với 2 nguyên tử oxy. Nguyên tử hydrogen có δH 9.91 (s, 1H) của nhóm CH tại vị trí số 8 liên kết với nguyên tử nitơ ở vị trí số 7. Ngoài ra, có 3 tín hiệu dạng singlet và 2 tín hiệu dạng doublet của các nguyên tử hydrogen của nhân thơm. Với các tín hiệu cộng hưởng đặc trưng trên tương ứng với các proton của phân tử berberine.
Bảng 3.3: Giá trị độ chuyển dịch hóa học 1H NMR của chất 3 TT TT 13C (ppm, 400 MHz) [93] 1H (δ ppm, J Hz) 13C (ppm, 500 MHz) 2 102.00 6.18 (s, 2H) 102.56 3a 149.87 150.30 4 108.34 7.10 (s, 1H) 108.91 4a 130.66 131.16 5 26.44 3.22 (t, J = 6.4 Hz, 2H) 26.81 6 55.29 4.95 (t, J = 6.4 Hz, 2H) 55.66 8 145.34 9.91 (s, 1H) 145.93 8a 120.40 121.88 9 150.33 150.87 10 143.97 144.15 11 123.42 8.01 (d, J = 9.1 Hz, 1H) 123.99 12 127.3 8.22 (d, J = 9.1 Hz, 1H) 127.25 12a 133.24 133.47 13 120.21 8.96 (s, 1H) 120.68 13a 137.55 137.97 13b 121.46 120.92 14 105.46 7.81 (s, 1H) 105.91 14a 147.72 148.16 9-OCH3 61.92 4.11 (s, 3H) 62.41 10-O-CH3 57.26 4.08 (s, 3H) 57.55
tử carbon. Trong đó có các tín hiệu cộng hưởng của nhóm methyl liên kết với các nguyên tử oxy (nhóm methoxy) tại δC là 57.55 và 62.41 ppm. Nhóm methylen ở vị trí C2 có δC 102.56 ppm liên kết với nguyên tử oxy. Hai nhóm methylen tại C5 và C6 có giá trị độ chuyển dịch hóa học lần lượt là 26.44 ppm (C-5) và 55.29 ppm (C-6). Ngoài ra còn có các nguyên tử carbon trong các vòng thơm. Trên phổ DEPT 135 của chất 3 cho thấy 3 nguyên tử carbon dạng methylen (-CH2-). So sánh với độ chuyển dịch hóa học của 13C của berberine nhận thấy các tín hiệu cộng hưởng của chất 3 tương đối tương đồng.
Hình 3.17. Phổ DEPT - 135 của chất 3
Trên phổ tương quan hai chiều HSQC và HMBC ta nhận thấy các tín hiệu tương tác trực tiếp và gián tiếp của các nguyên tử carbon và hydrogen.
Phổ HMBC chỉ ra một số sự tương quan quan trọng giữa tín hiệu của proton của methyl trong 2 nhóm methoxy tương tác với nguyên tử cacbn tại C-9 và C-10, do đó hai nhóm methyl liên kết với C9 và C10 qua nguyên tử oxy. Kết hợp với phổ NOESY, HSQC và HMBC các tín hiệu cộng hưởng của chất 3 được quy kết chi tiết như trong bảng 3.3.
Hình 3.19. Phổ HMBC của chất 3
Hình 3.21: Phổ khối lượng của 3
Kết hợp với phổ khối lượng có peak ion m/z 336.2 [M]+ (100%), kết hợp với phổ NMR nhận thấy chất 3 và so sánh với dữ liệu về phổ NMR, kết hợp tham khảo tài liệu tham khảo [93], có thể khẳng định chất 3 là berberine, có công thức cấu tạo:
Hình 3.22. Cấu trúc hóa học của chất 3
3.3. Kết quả nghiên cứu hoạt tính độc tế bào trên dòng tế bào ung thư HeLa (cổ tử cung) và A549 (tế bào ung thư gan) (cổ tử cung) và A549 (tế bào ung thư gan)
Hiện nay, Ung thư cổ tử cung và ung thư gan là những loại bệnh ung thư hay gặp ở người. Bên cạnh các biện pháp điều trị hiện nay để làm giảm tỉ lệ tử vong, chuẩn đoán sớm thì việc tìm kiếm các hợp chất mới có tác dụng chống ung thư có giá trị trong y học [93].
Ở công trình này, chúng tôi đã tiến hành thử nghiệm hoạt tính ức chế tế bào trên 2 dòng tế bào ung thư HeLa (cổ tử cung) và tế bào ung thư gan (A549) của các hợp chất phân lập được từ loài Cáp Đồng Văn.
Bảng 3.4: Tác động gây độc tế bào ung thư của 1 và 3 % ức chế tế bào % ức chế tế bào
Nồng độ (µg/ml)
1 3 Ellipticine
Hela A549 Hela A549 Hela A549
100 60.51 60.44 98.84 76.93 99.69 84.06 20 32.86 30.11 49.34 41.95 76.71 79.91 4 11.79 12.13 28.84 12.48 51.35 45.47 0.8 2.17 1.87 19.45 7.95 25.44 23.96 IC50 51,65± 5,11 71,44± 8,40 19,03± 1,55 35,51± 1,61 0,38± 0,03 0,48± 0,04
Kết quả trên cho thấy mẫu hai chất 1 và 3 thể hiện hoạt tính ức chế sự phát triển của các dòng tế bào ung thư với giá trị IC50 từ 19.03 – 71.44 µg/ml. Mẫu chất 1 thể hiện hoạt tính ức chế sự phát triển của các dòng tế bào ung thư với giá trị IC50 từ 51,65 - 71,44 µg/ml tuy nhiên yếu hơn chất chất 3 có IC50 là 19,03 - 35,51 µg/ml. Chất đối chứng dương Ellipticine hoạt động ổn định trong thí nghiệm.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. Kết luận
Luận văn thạc sĩ: “Nghiên cứu thành phần hóa học của lá loài Cáp đồng văn (Capparis dongvanensis)” thực hiện nghiên cứu phân lập hợp chất hữu cơ từ lá khô loài Cáp Đồng Văn. Luận văn đã hoàn thành các nhiệm vụ đề ra và đạt được các kết quả như sau:
1- Đã đánh giá định tính thành phần hóa học cao chiết ethanol và EA bằng phản ứng định tính.
2- Đã tiến hành sắc ký cột silica gel pha thuận, pha đảo để phân lập được 3 hợp chất từ cao chiết EA và sử dụng các phương pháp phổ hiện đại để xác định cấu trúc của 3 hợp chất phân lập được.
3- Đánh giá hoạt tính ức chế tế bào ung thư HeLa và A549 của 2 hợp chất
1 và 3 phân lập được. Kết quả cho thấy chất 1 và 3 thể hiện hoạt tính ức chế tế bào ung thư HeLa và A549.
2. Kiến nghị
Để cung cấp thêm nhiều thông tin khoa học hữu ích về loài Cáp Đồng Văn, tôi xin có vài kiến nghị như sau:
- Tiếp tục nghiên cứu thêm về thành phần hóa học của loài Cáp Đồng văn. - Thử nghiệm thêm các hoạt tính sinh học khác.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
TIẾNG VIỆT:
1. Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiểu, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2003), “Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam”, Nhà xuất bản Khoa học và kỹ thuật Hà Nội, tập II, tr. 222-223.
2. Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu. Các phương pháp nghiên cứu Hóa học cây thuốc. NXB KHKT, 1978.
3. Nguyễn Tuấn Quang, Triệu Duy Điệt, Vũ Bình Dương, Nguyễn Trung Hiếu, Chúc Mai Hiên (2011), “Bước đầu nghiên cứu thành phần hoá học của cây màn màn tím (Cleome chelidonii L.f.)”, Tạp chí Y Dược học quân sự, số 2- 2011, tr. 40-45.
4. Sỹ Danh Thường (2009), “Tuyển tập báo cáo Hội nghị Sinh thái và Tài nguyên sinh vật lần thứ 3”, Viện ST&TNSV-Viện KH&CN Việt Nam,
22/10/2009.
TIẾNG ANH:
5. Ageel, A.M., N.S. Parmar, J.S. Mossa, M.A. Al-Yahya, M.S. Al-Said, et al. 1986. Anti-inflammatory activity of some Saudi Arabian medicinal plants.
Agents and Actions 17(3-4), pp 383-384.
6. Ahmad, V.U., N. Ismail, and A.U.R. Amber. 1989. Isocodonocarpine from
Capparis decidua. Phytochemistry 28(9), pp 2493-5.
7. Ahmad, V.U., N. Ismail, S. Arif, and A.U.R. Amber. 1992. Two new N- acetylated spermidine alkaloids from Capparis decidua. J Nat Prod 55(10), pp 1509-12.
8. Ahmad, V.U., S. Arif, A.U.R. Amber, and K. Fizza. 1987. Capparisinine, a new alkaloid from Capparis decidua. Liebigs Ann Chem. 2, pp 161-162.
9. Ahmad, V.U., S. Arif, A.U.R. Amber, K. Usmanghani, and C.A. Miana. 1985. A new spermidine alkaloid from Capparis decidua. Heterocycles
23(12), pp 3015-20.
10.Ahmad, V.U., S. Arif, A.U.R. Amber, M.A. Nasir, and K.U. Ghani. 1986. A new alkaloid from root bark of Capparis decidua. Z Naturforsch B 41B(8), pp 1033-1035.
11. Ali, S.A., T.H. Al-Amin, A.H. Mohamed, and A.A. Gameel. 2009. Hepatoprotective activity of aqueous and methanolic extracts of Capparis
decidua stems against carbon tetrachloride induced liver damage in rats.
Journal of Pharmacology and Toxicology 4(4), pp 167-172.
12.Battu G., Pragada R., Murthy P.P., Rao E.S., Kiran P.M., Srikanth M., Praneeth V.S.D., Rao T.M. 2012, “In vitro anti-oxidant and hepatoprotective activities of Cleome chelidonii root extracts”, J. Pharm. Res., 5(6), pp. 3155- 7.
13.Thuong Danh Sy, Choudhary K.R., Bach The Tran, Hai Van Do, Quang Hong Bui, Tucker C.G., Mau Hoang Chu, Joongku L., Changyoung L., Sangmi E. (2017). Capparis dongvanensis sp. nov. (Capparaceae) from Vietnam. Nordic journal of Botany 35(3), pp 272 – 275..
14.Biswas S.M., Jana A. 2010, “Bioactivity of acid 2-amino-9-(4-oxoazetidin- 2-yl) nonanoic from the root exudates Cleome viscosa ”, Bio-Research, 8(1), pp. 651-656.
15.Bose A., Gupta J.K., Dash G.K., Ghosh T., Si S., Panda D.S. 2007, “Diuretic and antibacterial activity of aqueous extract of Cleome rutidosperma DC.”,
Indian J. Pharm. Sci., 69(2), pp. 292-294.
16.Bose A., Mondal S., Gupta J.K., Ghosh T., Si S., Debbhuti D. 2007, “A study on antimicrobial activity of Cleome rutidosperma DC”, J. Nat. Rem., 7(1), pp. 132-134.
17.Bose A., Smith P.J., Lategan C.A., Gupta J.K., Si S. 2010, “Studies on in
vitro antiplasmodial activity of Cleome rutidosperma”, Drug Res., 67(3), pp.
18.Cao, Y.L., X. Li, and M. Zheng. 2010. Capparis spinosa protects against oxidative stress in systemic sclerosis dermal fibroblasts. Archives of
Dermatological Research 302(5), pp 349-355.
19. Chakraborty A.K., Charde M.S., Roy H., Bhanja S., Behera M. 2010, “Comparative study of antioxidant activity between ethanolic and aqueous extract of Cleome rutidosperma”, Int. J. Pharm. Sci. Res., 1(11), pp. 112-116. 20.Chatterjee A., Chattopadhyay S.K., Tandon S., Kaur R., Gupta A.K., Maulik
P.R., Kant R. 2013, “Isolation of a unique dipyridodiazepinone metabolite nevirapine during large scale extraction of Cliv-92 from the seeds of Cleome viscosa”, Ind. Crops. Prod., 45, pp. 395-400.
21.Chaudhury, N.A. and D. Ghosh. 1970b. Taraxasterol and other triterpenoids
in Capparis sepiaria leaves. Phytochemistry 9(8), pp 1885.
22. Chauhan J.S., Srivastava S.K., Srivastava S.D. 1979, “Kaempferide 3- glucuronide from the roots of Cleome viscosa”, Phytochemistry, 18(4), p. 69. 23.Chauhan, E.M., A. Duhan, and C.M. Bhat. 1986. Nutritional value of ker
(Capparis decidua) fruit. Journal of Food Science and Technology 23(2), pp.
106-108.
24.Conforti, F., M.C. Marcotullio, F. Menichini, et al. 2011. The influence of collection zone on glucosinolates, polyphenols and flavonoids contents and biological profiles of Capparis sicula ssp. sicula. Food Science and
Technology International. 17(2), pp 87-97.
25. Cui, R.T., L. Yu, W. Wang, K. Mo, and X. Zou. 2008. Preliminary study on apoptotic effect induced by total saponins in Capparis spinosa on SGC-7901.
Harbin Shangye Daxue Xuebao, Ziran Kexueban 24(6), pp 652-656.
26.Dangi, K.S. and S.N. Mishra. 2011a. Antioxidative and β cell regeneration effect of Capparis aphylla stem extract in streptozotocin induced diabetic rat. Biology and Medicine (Aligarh) 3(3), pp 82-91.
27.Devi B.P., Boominathan R., Mandal S.C. 2003, “Evaluation of antipyretic potential of Cleome viscosa Linn. (Capparidaceae) extract in rats”, J.
28.Devi B.P., Boominathan R., Mandal S.C. 2004, “Studies on psychopharmacological effects of Cleome viscosa Linn. extract in rats and mice”, Phytother. Res., 18(2), pp. 169-172.
29.Dey P.S.A., Manavalan R. 2009, “Effect of the methanolic extract of Cleome
chelidonii on drug metabolizing enzymes, antioxidant status,
chemomodulatory efficacy in mice”, J. Basic Appl. Sci., 5(1), pp. 37-46. 30.Faheemuddin M.D., Janarthan M., Durraivel S. 2013, “Evaluation of
protective effect of Cleome viscosa extract on diet induced atherosclerosis in diabetic rats”, J. Chem. Pharm. Sci., 6(4), pp. 238-242.
31.Fu, X.P., T. Wu, M. Abdurahim, Z. Su, X.L. Hou, H.A. Aisa, and H. Wu. 2008. New spermidine alkaloids from Capparis spinosa roots. Phytochem Lett 1(1), pp 59-62.
32.Gadgoli, C., and S.H. Mishra. 1999. Antihepatotoxic activity of p- methoxybenzoic acid from Capparis spinosa. J Ethnopharmacol 66(2), pp 187-92.
33.Gan, Y., W. Chen, X. Wang, B. Han, C. Mu, H. Zhang, and Y. Zhuo. 2009. Chemical constituents of fruit of Capparis spinosa L. Shihezi Daxue Xuebao,
Ziran Kexueban 27(3), pp 334-336.
34.Garcia-Garcia, P., M. Brenes-Balbuena, C. Romero-Barranco, and A. Garrido-Fernandez. 2001. Biogenic amines in packed table olives and pickles. Journal of Food Protection 64(3), pp 374-378.
35.Germano, M.P., R. De Pasquale, V. D’Angelo, S. Catania, V. Silvari, and C. Costa. 2002. Evaluation of extracts and isolated fraction from Capparis
spinosa L. buds as an antioxidant source. Journal of Agricultural and Food
Chemistry 50(5), pp 1168-1171.
36.Gopal Y.V., Ravindernath A., Kalpana G., Reddy V.P. 2012, “Antitumor activity of Cleome viscosa against Ehrlich Ascites carcinoma (EAC) in Swiss albino mice”, Int. J. Phyto. Pharm., 2(2), pp. 51-55.
37.Inocencio, C., D. Rivera, F. Alcaraz, F.A. Tomás-Barberán. 2000. Flavonoid content of commercial capers (Capparis spinosa, C. sicula and C. orientalis) produced in Mediterranean countries. European Food Research and
Technology 212, pp 70-74.
38. Islam M.M., Islam M.Z., Shaekh M.P.E., Das P., Chowdhury H.K., Shahik S.M., Muzahid N.H., Khan M.A., Ekram A.E. 2014, “Screening of Cleome viscosa (L.) for dose mortality, insect repellency, cytotoxicity and larvicidal activities in the laboratory condition”, Int. J. Sci. Eng. Res., 5(1), pp. 2201-2212.
39.Jana A., Biswas S.M. 2011, “Lactam nonanic acid, a new substance from
Cleome viscosa with allelopathic and antimicrobial properties”, J. Biosci.,
36(1), pp. 27-35.
40.Jane R.R., Patil S.D. 2012, “Cleome viscosa: An effective medicinal herb for otitis media”, Int. J. Sci. Nat., 3(1), pp. 153-158.
41.Jente R., Jaklipwic J., Olatunji G.A. 1990, “A cembranoid diterpene from
Cleome viscosa”, Phytochemistry, 29(2), pp. 666-667.
42. Ji, Y., F. Dong, S. Gao, and X. Zou. 2008a. Apoptosis induced by Capparis
spinosa polysaccharide in human HepG2. Zhongcaoyao 39(9), pp 1364-1367.
43.Jiang, X.J., Q.Y. Meng, M.X. Yu, and H.J. Bai. 2010. Determination of stachydrine hydrochloride in different parts of Capparis spinosa L. by dual wavelength TLC scanning. Guangpu Shiyanshi 27(5), pp 1959-63.
44.Kanaujia, A., R. Duggar, S.T. Pannakal, et al. 2010. Insulinomimetic activity of two new gallotannins from the fruits of Capparis moonii. Bioorganic &
Medicinal Chemistry 18, pp 3940-3945.
45.Khanfar, M.A., S.S. Sabri, M.A. Zarga, and K.P. Zeller. 2003. The chemical constituents of Capparis spinosa of Jordanian origin. Nat Prod Res 17(1), pp 9-14.
46.Kumar S., Ray A.B., Konno C., Oshima Y., Hikino H. (1988), “Cleomiscosin D, a coumarino-lignan from seeds Cleome viscosa”, Phytochemistry, 27(2), pp. 636-638.
47.Li, Y., Y. Feng, S. Yang, and L. Xu. 2007. Chemical components of
Capparis spinosa L. Zhongcaoyao 38(4), pp 510-12.
48.Li, Y.Q., S.L. Yang, H.R. Li, and L.Z. Xu. 2008. Two new alkaloids from
Capparis himalayensis. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 56(2), pp
189-191.
49. Liu, K.C., C.J. Chou, and W.C. Pan. 1977. Studies on the constituents of the