2. Mục tiêu của đề tài
2.4. Phân lập, tinh chế các hợp chất
Phần cao chiết EA (45 gam) dùng để phân lập các chất trên sắc ký cột silica gel. Cao chiết hòa tan trong EA và được hấp phụ trên silica gel (Merck, kích thước hạt 63-20 µm). Chuẩn bị nhồi cột bằng 600 gam silica gel (Merck, kích thước hạt 63-20 µm) vào cột kích thước 7x100 cm. Cột được ổn định bằng dung môi n- hexane. Hệ dung môi sắc ký: acetone/n-hexane với tỉ lệ từ 1:20 đến 1/1(v/v). Thu được 6 phân đoạn. Kiểm tra các phân đoạn thu được sau khi kiểm tra các lọ hứng bằng sắc ký lớp mỏng TLC.
Tại phân đoạn 3, tiếp tục được chạy sắc ký cột silica gel pha thuận với hệ dung môi rửa giải là acetone/n-hexane với tỉ lệ 1/15 (v/v) thu được chất rắn không màu 1 (35 mg).
Tại phân đoạn 1, sau khi gộp và chưng cất bớt dung môi, để trong phòng thí nghiệm, sau 12h xuất hiện chất rắn không màu kết tủa, lọc kết tủa và rửa nhiều lần bằng acetone trên phễu lọc thu được chất rắn không màu 2 (22 mg).
Tại phân đoạn 6, sau khi gộp và chưng cất bớt dung môi, để trong phòng thí nghiệm, sau 6h xuất hiệt chất rắn màu vàng nhạt, lọc kết tủa và rửa nhiều lần bằng acetone trên phễu lọc thu được chất rắn không màu 3 (13 mg) (Hình 2.1).
Các chất rắn được sấy khô và bảo quản trong tủ lạnh để dùng thực nghiệm đo phổ NMR, MS và đánh giá hoạt tính sinh học.
Cao chiết EA (45 gam)
Phân đoạn 1 Phân đoạn 2 Phân đoạn 3 Phân đoạn 4 Phân đoạn 5 Phân đoạn 6
SKC
Pha động: n-hexane/acetone với tỉ lệ 1:20 đến 1:1 (v/v) Chất 1 (35 mg) Chất 2 (22 mg) Lọc thu chất rắn Lọc thu chất rắn Chất 3 (13 mg) Dịch lọc SKC Pha động: n-hexane/ acetone với tỉ lệ 15/1 (v/v) Phân đoạn 3.1 Dịch lọc Hình 2.1: Sơ đồ phân lập chất 1-3
Chương 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN