3.5.3.1. Phương phâp đânh giâ câ thể trong quần thể lai
Âp dung theo phương phâp chọn giống đối với những cđy sinh sản vô tính Chahal & Gosal (2004): Từng hạt đơn của từng tổ hợp được gieo riíng trong vườn chọn lọc vă mỗi hạt được trồng vă đânh giâ qua 3 vụ: củ bi, củ nhỡ vă củ thương phẩm. Trong quâ trình năy, câc củ giống của từng câ thể tạo ra qua sinh sản vô tính được trồng riíng thănh từng hăng gọi lă dòng lai. Câc dòng lai được săng lọc thông qua hình thâi đâp ứng tính trạng mục tiíu để chọn lọc dòng lai ưu tú.
Theo dõi câc chỉ tiíu về sinh trưởng, chất lượng hoa. Mô tả câc đặc điểm về hình thâi: dựa theo Quy phạm khảo nghiệm tính khâc biệt, tính đồng nhất vă tính ổn định của hoa lay ơn - UPOV 2013.
Phđn cấp sđu bệnh hại cđy theo quy chuẩn kỹ thuật quốc gia về phương phâp điều tra phât hiện dịch hại cđy trồng QCVN01-38:2010/BNNPTNT.
3.5.3.2. Phương phâp chọn dòng ưu tú theo mục tiíu
25 dòng lai lay ơn ưu tú được so sânh với đối chứng lă giống lay ơn Đỏ 09 (giống được Bộ NN&PTNT công nhận lă giống chính thức năm 2012). Câc giống được bố trí trong khối ngẫu nhiín đầy đủ với 3 lần nhắc lại. Mỗi giống trồng 100 củ/lần lặp, củ giống có chu vi 10-12cm đê được xử lý phâ ngủ.
Câc dòng ưu tú được chọn lọc theo chỉ số được tính toân trín phần mềm Selindex (Nguyễn Đình Hiền, 1995) đối với 7 tính trạng mục tiíu lă chiều dăi cănh hoa, chiều dăi đoạn mang hoa, đường kính cănh hoa, số hoa/cănh, đường kính hoa, thế lâ, mức độ khô đầu lâ với âp lực chọn lọc 12%. Chỉ số chọn lọc được tính theo công thức sau:
I = 2 1 ) ( i i k i i x M A
Trong đó: I lă chỉ số chọn lọc, Ai lă cường độ chọn, xi lă tính trạng chọn, Mi lă mục tiíu chọn.
Trong quâ trình nhđn giống câc dòng lai lay ơn ưu tú, mức độ mẫn cảm của câc dòng lai với NaF (hiện tượng khô đầu lâ) được đânh giâ trong điều kiện in vitro: vật liệu lă chồi in vitro của 25 dòng lai lay ơn vă giống lay ơn đỏ 09. Thử nghiệm trín môi trường nhđn nhanh có bổ sung NaF: MS + 30 g/l đường + 6,5 g/l agar + 0,5 mg/l BAP + NaF (0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 30, 45, 50, 55, 60 ppm). Mỗi liều lượng tiến hănh 30 mẫu/dòng. Đânh giâ liều lượng bắt đầu gđy ra hiện tượng khô đầu lâ (thời gian xuất hiện triệu chứng khô đầu lâ, tỷ lệ mẫu biểu hiện (%), mức độ chây lâ) vă ngưỡng liều lượng NaF gđy chết ở câc dòng lai (thời gian gđy chết, nồng độ gđy chết vă tỷ lệ mẫu chết (%)).
3.5.3.3. Đânh giâ câc dòng triển vọng tại một số địa phương
Ba dòng lai lay ơn triển vọng được so sânh, đânh giâ với đối chứng lă giống lay ơn Đỏ 09. Câc giống được bố trí khối ngẫu nhiín đầy đủ với 3 lần nhắc lại, diện tích mỗi ô lă 20 m2, mỗi ô trồng 400 củ/dòng, củ giống có chu vi 10 – 12 cm đê được xử lý phâ ngủ. Thí nghiệm được triển khai văo vụ Đông Xuđn 2019 - 2020 tại Gia Lđm - Hă Nội, An Dương - Hải Phòng, Dĩnh Trì - Bắc Giang.
Ba dòng lai lay ơn triển vọng được so sânh với giống đối chứng về tỷ lệ mọc mầm (%), thời gian sinh trưởng (ngăy), mức độ khô đầu lâ (cấp), chất lượng hoa vă năng suất hoa.
3.5.4. Nghiín cứu một số biện phâp kỹ thuật tăng hiệu quả nhđn giống của dòng lai lay ơn mới tạo ra lai lay ơn mới tạo ra
- Giai đoạn tạo củ bi bằng nuôi cấy in vitro
Mẫu cấy sử dụng lă củ giống của dòng lai J11: 4 loại củ có đường kính < 0,5 cm; 0,5 - <1,5 cm; 1,5 - <3 cm vă 3 – 4 cm cho thí nghiệm nhđn giống in vitro. Khử trùng mẫu cấy bằng câch cắt với kích thước 0,3 - 1 cm vă rửa nhiều lần bằng nước sạch. Ngđm ngập mẫu trong nước xă phòng loêng 5 - 7 phút, rửa sạch dưới vòi nước chảy vă trâng lại bằng nước cất. Sau đó mẫu được rửa lại bằng nước cất vô trùng rồi rửa bằng cồn 70% trong 30 giđy, tiếp đó khử trùng bằng dung dịch khử trùng ở câc nồng độ vă thời gian khâc nhau, vừa ngđm vừa lắc sau đó trâng lại 3 - 4 lần bằng nước vô trùng.
Thí nghiệm được bố trí theo hoăn toăn ngẫu nhiín, 3 lần lặp lại. Câc thí nghiệm được tiến hănh trong điều kiện ânh sâng, nhiệt độ, độ ẩm ổn định: sử dụng đền LED chuyín dụng, cường độ chiếu sâng khoảng 2000 - 3000 lux, thời gian chiếu sâng 16 giờ sâng/8 giờ tối, nhiệt độ phòng khoảng 25 - 26oC, độ ẩm từ
70 - 75%. Môi trường được điều chỉnh pH = 5,5 - 5,7 trước khi hấp khử trùng ở 121oC trong 20 phút, 1,0 atm.
Thời gian nghiín cứu: 2016 – 2017.
* Thí nghiệm 1: Xâc định phương phâp khử trùng phù hợp nhất cho mẫu cấy
CT1: H2O2 10% lần 1 trong 10 phút, lần 2 trong 5 phút CT2: H2O2 10% trong 10 phút
CT3: H2O2 10% trong 15 phút CT4: Javen 5,7% trong 15 phút
CT5: NaDCC 1% (sodium dichloroisocyanurate 1%) trong 15 phút.
Sử dụng mẫu cấy lă chồi chính của củ giống có đường kính 1,5 – 3 cm. Mỗi công thức sử dụng 30 mẫu cấy. Môi trường văo mẫu: MS + 1 mg/l BAP + 30 g/l đường + 6,0 g/l agar.
* Thí nghiệm 2: Xâc định chủng loại mẫu cấy thích hợp đến khả năng tâi sinh chồi lay ơn
CT1: Chồi chính của củ đường kính 3 – 4 cm CT2: Chồi bín của củ đường kính 3 – 4 cm CT3: Chồi chính của củ đường kính 1,5 - < 3 cm CT4: Chồi chính của củ đường kính 0,5 - < 1,5 cm CT5: Chồi chính của củ đường kính < 0,5 cm CT6: Lât cắt của củ đường kính 3 – 4 cm CT7: Lât cắt của củ đường kính 1,5 - < 3 cm
Mỗi công thức sử dụng 30 mẫu cấy. Âp dụng phương phâp khử trùng tốt nhất của thí nghiệm 1. Môi trường văo mẫu chồi: MS + 1 mg/l BAP + 30 g/l đường + 6,0 g/l agar. Môi trường văo mẫu lât cắt củ: MS + 5 mg/l BAP + 5 mg/l α-NAA+ 30 g/l đường + 6,0 g/l agar.
* Thí nghiệm 3: Xâc định môi trường thích hợp cho giai đoạn nhđn nhanh
CT1: 1 mg/l BAP + 0,25 mg/l α-NAA CT2: 1 mg/l BAP + 0,5 mg/l α-NAA CT3: 1 mg/l BAP + 0,75 mg/l α-NAA CT4: 2 mg/l BAP + 0,25 mg/l α-NAA
CT5: 2 mg/l BAP + 0,5 mg/l α-NAA CT6: 2 mg/l BAP + 0,75 mg/l α-NAA CT7: 3 mg/l BAP + 0,25 mg/l α-NAA CT8: 3 mg/l BAP + 0,5 mg/l α-NAA CT9: 3 mg/l BAP + 0,75 mg/l α-NAA
Môi trường cơ bản lă MS + 30 g/l đường + 6,0 g/l agar. Sử dụng mẫu cấy lă chồi đơn hình thănh từ TN1 vă TN2. Mỗi công thức 30 mẫu.
* Thí nghiệm 4: Xâc định môi trường tạo củ thích hợp
CT1: ½ MS + 0,5 mg/l IBA CT2: ½ MS + 1 mg/l IBA CT3: ½ MS + 1,5 mg/l IBA CT4: ½ MS + 2 mg/l IBA CT5: ½ MS + 2,5 mg/l IBA CT6: MS + 0,5 mg/l IBA CT7: MS + 1 mg/l IBA CT8: MS + 1,5 mg/l IBA CT9: MS + 2 mg/l IBA CT10: MS + 2,5 mg/l IBA
Môi trường có bổ sung 30 g/l đường vă 6,0 g/l agar. Sử dụng mẫu cấy lă chồi đơn tạo ra từ thí nghiệm 3. Mỗi công thức 15 bình, cấy 10 chồi đơn/bình. Chu kỳ chiếu sâng: 16 giờ sâng/8 giờ tối.
* Thí nghiệm 5:Xâc định chế độ chiếu sâng đến khả năng tạo củ vă chất lượng củ
CT1: 16 giờ sâng/8 giờ tối CT2: Tối hoăn toăn
CT3: 16 giờ sâng/8 giờ tối trong 4 tuần, sau đó tối hoăn toăn CT4: Tối hoăn toăn trong 4 tuần, sau đó 16 giờ sâng/8 giờ tối
Sử dụng mẫu cấy lă chồi đơn tạo ra từ thí nghiệm 3. Mỗi công thức 15 bình, cấy 10 chồi đơn/bình. Môi trường tạo củ lă môi trường tốt nhất được rút ra từ thí nghiệm 4.
* Thí nghiệm 6: Xâc định hăm lượng đường bổ sung đến khả năng tạo củ vă chất lượng củ hoa lay ơn tạo ra
CT1: Môi trường nền + 30 g/l đường CT2: Môi trường nền + 50 g/l đường CT3: Môi trường nền + 70 g/l đường CT4: Môi trường nền + 90 g/l đường CT5: Môi trường nền + 110 g/l đường
Sử dụng mẫu cấy lă chồi đơn tạo ra từ thí nghiệm 3. Mỗi công thức 15 bình, cấy 10 chồi đơn/bình. Môi trường nền lă môi trường với hăm lượng IBA tốt nhất cho tạo củ được rút ra từ thí nghiệm 4. Chế độ chiếu sâng tốt nhất được rút ra từ thí nghiệm 5.
- Giai đoạn tạo củ thương phẩm trín đồng ruộng
Vật liệu thí nghiệm: củ bi in vitro của dòng lai J11 có đường kính 0,9 – 1 cm. Củ giống được trồng với khoảng câch 15 x 20 cm, tương ứng với mật độ 14.000 củ/săo (40 củ/m2).
* Thí nghiệm 7: Ảnh hưởng loại phđn bón lâ bổ sung phù hợp cho giai đoạn trồng củ bi hoa lay ơn
CT1: Đầu trđu 501 CT2: Komix 201
CT3: Hyponex (20 – 20 - 20) CT4: Không phun bổ sung (ĐC)
Thí nghiệm được bố trí khối ngẫu nhiín đầy đủ 3 lần nhắc lại. Mỗi ô thí nghiệm 10 m2. Mật độ trồng củ bi lă 40 củ/m2.
+ Phđn bón lâ đầu trđu 501 thănh phần 30% N, 15% P2O5, 10% K2O, vi lượng. Pha 1 g/l nước
+ Phđn bón lâ Komix 201 Thănh phần: 2,6% N; 7,5% P2O5, 2,2% K2O, 800 ppm MgO, 200 ppm Zn, 30 ppm Mn, 50 ppm B, 100ppm Cu. Pha 2,5 ml/l nước
+ Phđn bón Hyponex thănh phần 20% N - 20% P2O5 - 20% K2O + TE + nguyín tố vi lượng: Bo, Co, Cu, Fe, Mn, Zn. Pha 1 g/l nước
Sử dụng phđn bón lâ cho câc công thức thí nghiệm ở thời kỳ cđy sau trồng 1 thâng có từ 3 - 4 lâ, định kỳ 15 ngăy 1 lần, sử dụng 4 lần.
* Thí nghiệm 8: Ảnh hưởng của thời điểm thu hoạch đến năng suất, chất lượng củ giống hoa lay ơn
CT1: Thu củ ngay sau thời điểm hoa tăn CT2: Thu củ sau thời điểm hoa tăn 15 ngăy CT3: Thu củ sau thời điểm hoa tăn 30 ngăy CT4: Thu củ sau thời điểm hoa tăn 45 ngăy CT5: Thu củ sau thời điểm hoa tăn 60 ngăy
Củ bi in vitro của dòng lai J11 được bố trí trồng theo khối ngẫu nhiín đầy đủ với 3 lần lặp lại, mỗi ô 10 m2, mật độ trồng 40 củ/m2, chủng loại phđn bón được âp dụng theo công thức tốt nhất được rút ra từ thí nghiệm 7. Củ giống thu hoạch ở câc thời điểm khâc nhau trín câc ô lă vật liệu cho thí nghiệm 8, được lăm sạch, hong khô vă đânh giâ.
- Chỉ tiíu theo dõi
Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) = (∑ Số mẫu nhiễm / ∑ Số mẫu cấy) x 100 Tỷ lệ tâi sinh (%) = (∑ Số mẫu tâi sinh / ∑ Số mẫu cấy) x 100 Tỷ lệ hóa nđu (%) = (∑ Số mẫu hóa nđu/ ∑ Số mẫu cấy) x 100
Tỷ lệ không phản ứng (%)= (∑ Số mẫu không phản ứng/∑ Số mẫu cấy) x 100 Thời gian phât sinh chồi (ngăy): Từ khi cấy đến khi hình thănh chồi
Đặc điểm chồi/mẫu phât sinh: Mô tả bằng cảm quan (mău sắc, kích thước chung, hình thâi)
Tỷ lệ tạo chồi (%) = (∑ Số tạo chồi / ∑ Số mẫu cấy) x 100 Số chồi/mẫu(chồi) =∑ Số chồi / ∑ Số mẫu tạo chồi
Đường kính chồi(cm ) =∑ đường kính chồi / ∑ Số chồi
Tỷ lệ mẫu tạo củ (%) = (∑ mẫu tạo củ / ∑ Số mẫu cấy ) x 100
Đường kính củ (cm) = ∑ Đường kính củ / ∑ Số củ Khối lượng củ trung bình (cm) = ∑ Trọng lượng củ /∑ Số củ
Thời gian thu hoạch(ngăy): từ khi cấy sang môi trường tạo củ đến khi thu hoạch củ
Phđn loại củ in vitro thu hoạch: loại I có đường kính 1-1,5cm; loại II có đường kính 0,5-1cm; loại III có đường kính <0,5cm
Phđn loại củ giống ngoăi đồng: loại 1 (chu vi 8-14cm), loại 2 (chu vi 4-8 cm), loại 3 (chu vi <4 cm)
Chỉ số hình dạng được xâc định bằng công thức: I=H/D. Trong đó, H lă chiều cao củ giống lay ơn, D lă đường kính củ giống lay ơn (tính theo cm). Dựa văo đó chia lăm 3 dạng củ: dẹt (I< 0,85), tròn (I= 0,85-1), dăi (I> 1)
Tỷ lệ củ hỏng (%): Số củ hỏng/tổng số củ thu hoạch x100