Một dòng lai hoa lay ơn mới được tạo ra từ phĩp lai hữu tính sau khi trải qua 3 vụ từ gieo hạt đến củ bi, củ nhỡ vă củ thương phẩm sẽ có số lượng vật liệu ban đầu tương đối ít. Trong đó có củ to với đường kính từ 3 – 4 cm vă câc củ con với đường kính dao động từ 0,5 – 2 cm. Với mục đích tạo ra được nhiều mẫu cấy mă không lăm mất đi vật liệu ban đầu, chúng tôi tiến hănh xâc định chủng loại mẫu cấy thích hợp nhất để nhđn nhanh dòng lai hoa lay ơn J11 dựa trín hai đường hướng tâi sinh của mô tế băo: trực tiếp từ chồi chính, chồi bín vă giân tiếp từ lât cắt củ.
Bảng 4.37. Ảnh hƣởng của chủng loại mẫu cấy đến khả năng tâi sinh chồi của dòng lai J11 (sau 4 tuần nuôi cấy)
CTTN Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) Tỷ lệ mẫu hóa nđu (%) Tỷ lệ mẫu không phản ứng (%) Tỷ lệ mẫu tâi sinh chồi (%) Thời gian PSHT (ngăy) Số chồi/mẫu (chồi) Đặc điểm chồi/mẫu phât sinh
CT1 26,7 16,7 0,0 60,0 10,5 4,3 ± 1,01a Chồi mập, xanh đậm CT2 13,3 6,7 16,7 63,3 21,7 1,1 ± 0,65b Chồi nhỏ, xanh nhạt CT3 10,0 13,3 0,0 76,7 12,3 4,5 ± 1,24a Chồi mập, xanh đậm CT4 10,0 6,7 26,7 56,7 15,1 1,2 ± 0,76b Chồi nhỏ, xanh đậm CT5 6,7 10,0 23,3 60,0 13,5 1,1 ± 0,84b Chồi nhỏ, xanh đậm CT6 23,3 63,3 13,4 0 35,3 0 Xuất hiện callus vă lâ CT7 16,7 66,7 16,6 0 38,5 0 Xuất hiện callus vă lâ
CV (%) 7,1
LSD0,05 0,62
Ghi chú: CT1: Chồi chính của củ đường kính 3 – 4 cm;CT2: Chồi bín của củ đường kính 3 – 4 cm;CT3: Chồi chính của củ đường kính 1,5 – 3 cm;CT4: Chồi chính của củ đường kính 0,5 - 1,5 cm;CT5: Chồi chính của củ đường kính < 0,5 cm;CT6: Lât cắt của củ đường kính 3 – 4 cm;CT7: Lât cắt của củ đường kính 1,5 - 3 cm
Tỷ lệ mẫu nhiễm dao động từ 6,7 - 26,7%. Sử dụng mẫu cấy lă củ con (CT3,CT4, CT5) cho tỷ lệ mẫu nhiễm thấp 6,7 - 10%.Tỷ lệ mẫu nhiễm đạt cao khi sử dụng chồi chính của củ có đường kính 3 - 4cm vă lât cắt của củ lần lượt lă 26,7% vă 23,3% (Bảng 4.37).
Mẫu cấy lă lât cắt củ sản sinh ra nhiều hợp chất thứ cấp lăm cho mẫu bị hóa nđu, tỷ lệ năy đạt từ 63,3 - 66,7% ở 2 công thức CT6 vă CT7. Câc công thức còn lại tỷ lệ mẫu hóa nđu chỉ từ 6,7 - 16,7%.
Tỷ lệ mẫu không phản ứng ở mức thấp với tất cả câc công thức 0 - 26,7%. Tuy nhiín đối với CT6 vă CT7 mẫu cấy chỉ phât sinh callus vă thể dạng lâ
Khả năng tâi sinh của mẫu đạt tương đối cao từ 56,7 - 76,7% ở câc công thức sử dụng chồi chính vă chồi bín. Thời gian phât sinh chồi ở câc công thức sử dụng chồi chính khoảng 10 - 15 ngăy. Bật chồi sớm nhất lă CT1 mẫu cấy lă chồi chính của củ đường kính 3 – 4 cm với 10,5 ngăy. Trong khi đó câc mẫu cấy sử dụng lât cắt củ phải cần 35 - 38 ngăy để hình thănh callus.
Đối với mẫu cấy lă chồi bín vă câc củ có kích thước nhỏ, số lượng chồi tạo ra ít từ 1 - 2 chồi. Hai công thức còn lại sử dụng chồi chính thì ngoăi chồi chính mọc ra, xung quanh xuất hiện thím nhiều chồi kích thước nhỏ do đó số chồi mới tạo ra ở CT1 vă CT3 lần lượt lă 4,3 - 4,5 chồi/mẫu cấy.
Điều năy tương đồng với nghiín cứu của Priykamari and Sheela (2005) nín sử dụng mẫu cấy lă chồi của củ con có đường kính 0,8 - 2,1 cm. Chồi đỉnh có nhiều tế băo đang phđn chia, việc bổ sung chất kích thích sinh trưởng sẽ góp phần tạo ra nhiều chồi mới hơn.
(a) (b) (c)
(d) (e) (f)
(a)chồi chính của củ có đường kính 3 - 4 cm, (b)chồi bín của củ có đường kính 3 – 4 cm, (c) chồi chính của củ có đường kính 1,5 – 3 cm, (d) chồi chính của củ có đường kính 0,5 - 1,5 cm, (e) chồi chính của củ
có đường kính < 0,5 cm, (f) lât cắt của củ có đường kính 3 – 4 cm
Hình 4.17. Khả năng phât sinh hình thâi ở câc chủng loại mẫu cấy khâc nhau của dòng lai lay ơn J11
Về chất lượng chồi, câc chồi mới tạo ra từ mẫu cấy chồi đỉnh có chất lượng tốt hơn chồi mập vă mău xanh đậm
Tóm lại, Sử dụng mẫu cấy lă chồi đỉnh của củ có đường kính 1,5 – 3 cm cho tỷ lệ nhiễm thấp 10%, tỷ thời gian phât sinh chồi nhanh, số chồi trung bình tạo ra lă 4,5 chồi/mẫu.