Được tiến hành tại trung tâm xét nghiệm Huyết học và truyền máu bệnh viện Trung ương Huế.
- Thời gian chảy máu:
*Nguyên lý: Thời gian chảy máu phản ánh chức năng cầm máu của mao mạch và tiểu cầu, tính thời gian chảy máu chúng tôi dựa vào phương pháp Duke. * Phương pháp tiến hành: dùng kim chủng chích mạnh vào da dái tai đã được sát khuẩn. Vết chích phải tương đối sâu khoảng 1 mm, đều. Sau khi chích, máu sẽ từ từ xuất hiện và chảy thành giọt. Giọt máu đầu tiên phải đạt tiêu chuẩn có đường kính vào khoảng 1cm. Lấy giấy thấm, cứ 30 phút thấm máu một lần, tránh không cho thấm sát vào da. Nói chung các giọt máu chảy xuống nhỏ dần đi cho đến khi máu ngừng chảy hoàn toàn, đếm số giọt máu trên giấy thấm rồi chia đôi, đó là thời gian chảy máu.
* Kết quả thời gian chảy máu theo hằng số sinh học người Việt Nam bình thường là 2 phút 50 giây ± 42 giây (ít nhất là 2 phút, nhiều nhất là 5 phút, quá 6 phút được coi là bệnh lý) [16] [28].
- Thời gian đông máu:
* Nguyên lý: thời gian đông máu phản ánh chức năng đông máu nói chung, đặc biệt là thăm dò cơ chế trong quá trình đông máu. Có nhiều phương pháp tính thời gian đông máu nhưng ở đây chúng tôi dùng phương pháp Lee và White.
nước muối sinh lý, lấy 5 ml máu tĩnh mạch bắt đầu bấm giờ. Cho máu vào hai ống nghiệm 12 x 100 mm, nhẵn, sạch và vô khuẩn, đã được tráng qua nước muối sinh lý và để sẵn ở cách thủy 370C, khi cho máu phải cho dọc thành ống, mỗi ống vừa đủ 2 ml. Sau 3 phút, cứ mỗi phút một lần, về cuối cứ 1/2 phút 1 lần nghiêng ống thứ nhất cho đến khi đông hẳn thì bấm giờ. Sau đó tiếp tục nghiêng ống thứ 2, cứ 1/2 phút một lần cho đến khi đông hẳn lại bấm giờ, làm thật nhẹ nhàng.
Thời gian đông máu tính bằng cách lấy số trung bình của thời gian đông máu 2 ống.
* Kết quả thời gian đông máu bình thường theo hằng số huyết học người Việt Nam là 9 phút 15 giây ± 1 phút 25 giây (thấp nhất là 7 phút, cao nhất là 15 phút, thời gian đông máu dưới 6 phút hoặc trên 15 phút được coi là bệnh lý) [16] [28].
- Thời gian Howell:
* Nguyên lý: Huyết tương sau khi chống đông bằng Natrixitrat hoặc Natrioxalat, sẽ được làm đông lại bằng cách cho Canxi clorua vào và thời gian đông máu lúc này gọi là thời gian phục hồi canxi. Xét nghiệm này có giá trị tương đương với thời gian đông máu, thăm dò toàn bộ quá trình đông máu nhưng nhạy hơn rất nhiều.
* Phương pháp tiến hành: phân phối huyết tương vào hai ống nghiệm có đường kính 1 cm, mỗi ống 0,2 ml huyết thanh. Để bình cách thủy 3 phút, sau đó cho vào ống thứ nhất 0,2 ml Canxi clorua M/40. Bấm đồng hồ, sau 15 đến 30 giây cho 0,2 ml Canxi clorua M/40 vào ống thứ hai. Sau 1 phút nghiêng ống thứ nhất, cứ 30 giây nghiêng một lần cho đến khi đông chắc. Lúc đó chuyển sang xem ống thứ hai, khi ống thứ hai đông thì bấm đồng hồ dừng lại. Thời gian phục hồi Canxi là thời gian đông ở ống thứ hai.
bình thường là 1 phút 45 giấy ± 17 giây (nếu quá bình thường 1 phút là bệnh lý) [16] [28].
- Thời gian thromboplastin từng phần hoạt hóa (APTT: Activated Partial Thromboplastin Time):
* Nguyên lý : Xét nghiệm này còn gọi là thời gian cephalin - kaolin hoạt hóa (TCK). Là thời gian đông của huyết tương nghèo tiểu cầu (do ly tâm máu với tốc độ cao), đã được chống đông bằng Natricitrat, sau khi cho Canxi trở lại và Cephalin (chất này có tính năng giống yếu tố tiểu cầu III), Kaolin (để hoạt hóa tức thời và hoàn toàn yếu tố tiếp xúc) xét nghiệm này cũng thăm dò toàn bộ quá trình đông máu trừ yếu tố tiểu cầu III.
* Phương pháp tiến hành:
+ Phân phối huyết tương nghèo tiểu cầu của máu chứng và máu bệnh nhân vào các ống nghiệm, mỗi ống 0,1 ml, để vào bình cách thủy.
+ Cephalin pha nồng độ theo hiệu giá bằng Michaelis.
+ Kaolin 0,5% (100mg kaolin trong 20 ml michaelis). Trộn Cephalin và Kaolin theo tỷ lệ 1/1.
+ Cho 0,1 ml Cephalin - Kaolin vào ống nghiệm có 0,1ml huyết tương nghèo tiểu cầu, lắc đều, cứ 15 giây lắc đều 1 lần, làm trong 2 phút ở nhiệt độ 370C.
+ Sau 2 phút lắc như vậy, cho 0,1 ml Canxi clorua M/40 vào và bấm đồng hồ, theo dõi thời gian đông bằng cách 30 giây sau khi bấm đồng hồ thì đảo ống và theo dõi cho đến khi xuất hiện màng trắng sẽ bấm đồng hồ dừng lại.
* Kết quả thời gian Cephalin-Kaolin theo hằng số huyết học người Việt Nam bình thường là 30 - 45 giấy, tỷ số APTT của người thử trên người chứng từ 0,9 - 1,15 (thời gian APTT dài hơn chứng 10 giây được coi là bệnh lý).
Ở đề tài này chúng tối đã sử dụng thuốc thử CK của hẵng Stago trên máy Star của cộng hoà Pháp sản xuất [16] [28].
* Nguyên lý: Thời gian Quick là thời gian đông của huyết tương đã được chống đông bằng Natrioxalat, nay lại đặt vào trong một môi trường có Canxi đồng thời có thừa Thromboplastin. Thời gian Quick thăm dò tốc độ hình thành Thrombin.
Trước đây người ta cho rằng thời gian Quick phản ánh tình hình của Prothrombin, hiện nay người ta thấy nó phản ánh không những Prothrombin mà cả Proconvertin, Proaccelerin và yếu tố Stuart, gọi chung là nhóm Prothrombin. Ngoài ra còn thăm dò Fibrinogen nữa.
- Phương pháp tiến hành: sử dụng thuốc thử Neoplastin của hãng Stago trên máy Star cộng hòa Pháp sản xuất.
- Kết quả: Vì phụ thuộc vào mẫu Thromboplastin mỗi đợt xét nghiệm một cách khác nên kết quả phải so sánh với kết quả làm ở một người thật bình thường được chọn làm chứng. Quick đề nghị nên chọn mẫu Thromboplastin nào mà cho kết quả với huyết tương của chứng từ 11 giây đến 16 giây, tốt nhất là 12 giây 1/2.
Thời gian Quick đó được coi như tương đương với tỷ lệ nhóm Prothrombin là 100%. Từ kết quả chứng đó, người ta pha loãng huyết tương trong dung dịch muối sinh lý với nhiều nồng độ khác nhau và làm thời gian Quick với mỗi mẫu huyết tương đó. Tất cả những kết quả này sẽ được nghi thành đường biểu diễn cho một mẫu Thromboplastin nhất định. Mỗi khi xét nghiệm cho một bệnh nhân chỉ cần làm đối chiếu kết quả vào đường biểu diễn sẽ thấy ngay tỷ lệ nhóm Prothrombin cần tìm.
Ở người bình thường theo hằng số huyết học người Việt Nam thì tỷ phức hệ Prothrombin thay đổi từ 80 - 100%, mức thấp nhất có thể gặp 70% [16] [28].
- Thời gian co cục máu:
* Nguyên lý: Co cục máu là giai đoạn cuối cùng của cầm máu và đông máu phụ thuộc vào men Retractozym của tiểu cầu, qua men này có thể biết được (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
chức năng nói chung của tiểu cầu.
* Phương pháp tiến hành: dùng bơm tiêm lấy 3 ml tĩnh mạch phân phối vào hai ống nghiệm nhỏ để đông, sau đó để vào bình cách thủy 370C, sau 4 giờ lấy ra đọc kết quả hoặc có thể dùng luôn hai ống máu đã làm thời gian máu đông theo phương pháp Lee-White để 370C sau 4 giờ đọc kết quả.
- Kết quả: có 6 hình thái cục máu đông sau đây: * Cục máu co hoàn toàn.
* Cục máu không co. * Huyết tương đông trước. * Co cục máu huyết tương. * Cục máu bị nát.
* Cục máu co không hoàn toàn.
Bình thường cục máu co hoàn toàn sau 1 - 3 giờ tách khỏi ống nghiệm lơ lửng trong huyết thanh, lượng huyết thanh rỉ ra vào khoảng 1/3 lượng máu để đông [16] [18].
- Nghiệm pháp Vonkaulla:
* Nguyên lý: Bằng cách tủa Euglobulin trong huyết tương, người ta loại trừ các chất ức chế và thu hoạch các chất hoạt hóa của hệ thống tiêu sợi huyết. Tủa đó bao gồm khoảng 100% Protit toàn phần, gần hết tiền sợi huyết, yếu tố V, yếu tố VII và rất ít chất kháng Plasmin. Kỹ thuật này có độ nhạy cao giúp ta theo dõi tiêu sợi huyết song không phản ánh mức độ tiêu sợi huyết.
* Phương pháp tiến hành:
+ Chuẩn bị ống nghiệm nhỏ đánh số từ 1, 2, 3, 4.
+ Cho vào ống 1 và 2 nước cất 3 ml, huyết tương làm chứng 0,3 ml.
+ Cho vào ống 3, 4: nước cất 3 ml, huyết tương bệnh nhân 0,3 ml trộn đều nước cất và huyết tương.
+ Quay ly tâm 480 vòng/phút, gạn bỏ nước trong ở phần trên, lấy tủa. + Dùng giấy lọc thấm khô thành ống.
+ Cho vào mỗi ống 0,3 ml dung dịch đệm Michaelis.
+ Cho vào mỗi ống một giọt Canxi clorua 0,1 m cho đông và bấm đồng hồ.
* Kết quả giá trị bình thường trên 3 giờ, tiêu Fibrin cấp tính 30 phút, tiêu Fibrin bán cấp tiềm tàng dưới 150 phút [16] [28].
- Nghiệm pháp Ethanol:
* Nguyên lý: Để chẩn đoán hội chứng đông máu rải rác nội mạch. Khi máu bị đông trong lòng mạch lan toả, thì Trombin tự do xuất hiện trong máu. Tác dụng này của Trombin lên Fibrinogen dẫn tới sự hình thành Monome Fibrin. Những Monome này kết hợp với Fibrinogen hoặc sản phẩm thoái hóa của Fibrinnogen và Fibrin, tạo thành những phức hệ hòa tan. Để phát hiện phức hệ hòa tan này người ta cho thêm rượu vào, sẽ xuất hiện gel hóa.
* Phương pháp tiến hành: lấy máu tĩnh mạch, cho vào ống nghiệm có tráng Silicon chống đông bằng Xitrat natri 3,8% theo tỷ lệ 1/10. Để máu tự lắng hoặc quay ly tâm nhẹ, tách lấy huyết tương để làm xét nghiệm. Cho 0,45ml huyết tương vào ống nghiệm tráng Silicon, cho thêm vào 0,15 ml cồn tuyệt đối hoặc 99 độ pha loãng 1/2 với nước cất, lắc đều, nút chặt. Để tủ lạnh ở 40C trong 10 phút, lấy ra đọc kết quả nhanh.
* Kết quả:
+ Trong như lúc đầu là bình thường. + Tủa là có nghi ngờ.
+ Gel hóa là có dương tính [16] [28]. - Định lượng Fibrinogen:
*Nguyên lý: Fibrinogen có đặc tính kết tủa ở 560C, độ kết tủa này tỷ lệ với Fibrinogen, do đó cho phép xác định được lượng fibrinogen.
* Phương pháp tiến hành: Sử dụng thuốc thử Fibri - Prest của hãng Stago của cộng hòa Pháp sản xuất.
*Kết quả: với phương pháp này kết quả bình thường fibrinogen huyết tương 10,2 - 13,6 micromol/l (300 - 400 mg/dl) [16] [28].
-Xét nghiệm tiểu cầu: +Số lượng:
* Nguyên tắc muốn biết số lượng tiểu cầu của một người tăng hay giảm người ta dùng cách đếm trực tiếp hoặc gián tiếp. Rồi tính ra số lượng tiểu cầu trong 1mm3, dung dịch pha loãng phải phá vỡ hồng cầu và giữ nguyên vẹn tiểu cầu.
*Tiến hành lấy máu theo quy trình và làm xét nghiệm trên máy tự động CellDin 1.700 của hãng Abbott.
* Kết quả của người bình thường từ 200 - 300 x 109/lít (200 - 300 G/L). + Chất lượng tiểu cầu: tiểu cầu có vai trò quan trọng trong cầm máu và đông máu. ở dạng lưu động tiểu cầu là những phần tử rất nhỏ, tròn hoặc bầu dục. ở dạng không lưu động thì bám vào thành mạch máu và tiểu cầu có hình sao, hình bướm, hình phẩy, phần ngoài tiểu cầu có màu kiềm hoặc bên trong có nhiều hạt bắt màu đỏ tím. Trong trường hợp bệnh lý tiểu cầu to, nhỏ không đều nhau có thể bắt màu kiềm nhiều hơn, nhiều hoặc ít hạt hơn bình thường, có thể xuất hiện nhiều lỗ hỏng, hoặc những hạt bất thường bên trong tiểu cầu. Tất cả các dạng bệnh lý này có giá trị rõ rệt khi vượt quá 10% tổng số tiểu cầu, tiến hành soi trên máy hiển vi quang học. Ngoài ra có thể đo độ kết dính tiểu cầu với nhiều phương pháp khác nhau [16] [28].
-Nghiệm pháp dây thắt: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
*Nguyên lý để thăm dò quá trình cầm máu do mạch máu và tiểu cầu có hai phương pháp để đo sức bền mao mạch: phương pháp gây sức hút và phương pháp gây sức ép. ở đề tài này chúng tôi dùng bằng phương pháp sức ép.
*Tiến hành: nguyên tắc là phải làm cản trở được tuần hoàn tĩnh mạch trong khi tuần hoàn động mạch vẫn duy trì. Dùng huyết áp kế sau khi đo huyết áp tối đa và tối thiểu của bệnh nhân duy trì 10 phút ở huyết áp trung bình. Sau khi bỏ huyết áp kế tiếp tục theo dõi 10 phút. Không nên dùng giây Garo vì nó không đảm bảo chính xác.
*Kết quả: với phương pháp này bình thường sau khi bỏ huyết áp kế, da cẳng tay và bàn tay hơi tím nhẹ một lúc sau thì trở lại như cũ nếu không có xuất huyết nào bình thường. Nếu ngay dưới nếp khuỷu một số ít đốm chảy máu với số lượng không quá 10 đốm trong 1 vòng có đường kính 2,5 cm vẫn được coi là bình thường. Nếu bệnh lý thì số lượng đốm sẽ xuất hiện nhiều hơn và kích thước to nhỏ không đều nhau [16].