CHIẾT TÁCH VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CÁC DỊCH
CHIẾT BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT SONG SONG 3.3.1. Trong dung môi petroleum ether
a. Kết quả khảo sát thời gian, tỉ lệ R/L trong quá trình chiết tách:
Điều kiện tiến hành: Bột cơm quả Muồng hoàng yến: 10 gam, thể tích petroleum ether thay đổi lần lượt là: 100, 125, 150, 175, 200ml, thời gian chiết
soxhlet: 6, 8, 10,12 h. Cất loại dung môi thu được cao chiết. Các kết quả thu
được trình bày trên bảng 3.6
Bảng 3.6. Ảnh hưởng của thời gian ngâm chiết và thể tích petroleum ether đến khối lượng cao chiết
Thế tích
petroleum ether (ml) 100 125 150 175 200
Thời gian chiết (giờ)
Khối lượng cao chiết (gam)
0.032 0.047 0.068 0.063 0.075 6 0.036 0.058 0.069 0.072 0.083 8 0.042 0.064 0.086 0.087 0.088 10 0.042 0.068 0.083 0.088 0.089 12
@Nhận xét:
Qua bảng 3.6 ta thấy, khi thể tích dung môi tăng và thời gian khảo sát tăng thì khối lượng cao chiết cũng tăng dần và đạt khối lượng cao nhất ở thời gian chiết 10 giờ với tỉ lệ R/L là 10/150 là 0.086g; thời gian chiết trong 12 giờ thì khối lượng cao chiết có tăng nhưng không đáng kể. Điều này có thể giải thích là do khi tăng thời gian chiết các chất trong cơm quả Muồng Hoàng Yến không hòa tan thêm được. Vậy thời gian chiết tối ưu là 10 giờ và tỉ lệ R/L thích hợp là 10g mẫu cơm quả Muồng Hoàng Yến/ 150ml dung môi petroleum ether.
a. Thành phần hóa học trong dịch chiết petroleum ether:
Phổ GC-MS của dịch chiết petroleum ether cơm quả Muồng hoàng yến được thể hiện ở hình 3.2. Kết quả xác
định thành phần hóa học được tổng hợp ở bảng 3.7.
Bảng 3.7. Thành phần hóa học trong dịch chiết petroleum ether bằng phương pháp chiết song song
STT RT Area % Name Formula 1 5.110 0.68 Heptane,2,2,4,6,6- pentamethyl- (C12H26) 2 8.065 0.48 4H-pyran-4-one,2,3- dihydro-3,5- dihydroxy-6-methyl (C6H8O4) 3 11.014 0.28 Naphthalene, 1- methy- (C11H10) 4 18.181 0.70 Hexadecane (C16H34) 5 19.816 0.35 Ethyl citrate (C12H20O7)
6 27.352 6.86 n-hexadecanoic acid (C16H32O2)
7 43.440 14.54 Gamma- sitosterol (C29H50O)
@ Nhận xét:
Từ kết quảở bảng 3.7 cho thấy phương pháp GC-MS đã xác định được 7 cấu tử trong dịch chiết petroleum ether từ cơm quả Muồng hoàng yến bao gồm hidrocacbonmạch dài 12C÷16C, hợp chất thơm và phytosterol. Các cấu tử chính là: gamma-sitosterol chiếm hàm lượng cao nhất 14.54%. Chất có hàm lượng tương đối cao tiếp theo là n-hexadecanoic acid chiếm 8.86 %. 4H-pyran-4- one,2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl chiếm 0.48%, ethyl citrate chiếm 0.35%. Naphthalene, 1-methy- có hàm lượng 0,28%.
3.3.2. Trong dung môi chloroform
a. Kết quả khảo sát thời gian, tỉ lệ R/L trong quá trình chiết tách
Điều kiện tiến hành: Bột cơm quả muồng hoàng yến: 10 gam, thể tích chloroform thay đổi lần lượt là: 100, 125, 150, 175, 200ml thời gian chiết soxhlet: 6, 8, 10,12 h. Cất loại dung môi thu được cao chiết. Các kết quả thu
Bảng 3.8. Ảnh hưởng của thời gian ngâm chiết và thể tích chloroform đến khối lượng cao chiết
Thế tích chloroform (ml) 100 125 150 175 200 Thời gian chiết (giờ) Khối lượng cao chiết (gam) 0.309 0.389 0.408 0.416 0.429 6 0.331 0.391 0.423 0.427 0.438 8 0.336 0.447 0.489 0.492 0.493 10 0.381 0.452 0.494 0.493 0.491 12 @ Nhận xét:
Qua bảng 3. 8 ta thấy, khi thể tích dung môi tăng và thời gian khảo sát tăng thì khối lượng cao chiết cũng tăng dần. Khối lượng cao chiết khi chiết trong thời gian 10,12 giờ cao hơn đáng kể so với trong thời gian 6, 8 giờ;
đồng thời ở các tỉ lệ R/L cũng tăng lên. Ở tỉ lệ 10g mẫu cơm quả Muồng Hoàng Yến/ 150 ml dung môi chloroform trong thời gian 10 giờ, khối lượng cao chiết thu được là 0.489g nhỏ hơn so với khối lượng cao chiết ở tỉ lệ 10g mẫu/ 175ml là 0.492g và cao hơn khối lượng cao chiết ở tỉ lệ 10g mẫu/ 125ml là 0.447g, đồng thời cũng nhỏ hơn cùng tỉ lệ trong thời gian 12 giờ nhưng không đáng kể. Ở những thể tích dung môi lớn hơn và thời gian chiết lớn hơn nhưng khối lượng cao chiết tăng không đáng kể vì không thể hòa tan thêm các chất trong cơm quả Muồng Hoàng Yến. Vậy tỉ lệ R/L thích hợp là 10g mẫu / 150 ml dung môi chloroform trong thời gian 10 giờ.
b.Thành phần dịch hóa học có trong dịch chiết chloroform
Phổ GC-MS của dịch chiết chloroform từ cơm quả Muồng hoàng yến được thể hiện ở hình 3.3. Kết quả xác
định thành phần hóa học trong dịch chiết chloroform từ cơm quả Muồng hoàng yến được tổng hợp ở bảng 3.9.
Bảng 3.9. Thành phần hóa học trong dịch chiết chloroform bằng phương pháp chiết song song
STT RT Area% Name Formula
1 8.079 6.67 4H-pyran-4-one, 2,3- dihydro-3,5-dihydroxyl- 6-methyl (C6H8O4) 2 9.824 14.84 2-Furancarboxaldehyde, 5-methyl- (C6H6O2) 3 27.238 4.68 n-hexadecanoic acid (C16H32O2) 4 43.405 6.37 β-sitosterol (C29H50O) @ Nhận xét:
Từ kết quả ở bảng 3.9 cho thấy phương pháp GC-MS đã xác định được 4 cấu tử trong dịch chiết chloroform từ cơm quả Muồng hoàng yến. Đã có sự
xuất hiện các hợp chất phân cực là dẫn xuất của phenol, andehyd, aicd béo hữu cơ và phytosterol: Các chất hữu cơ chiếm hàm lượng cao nhất là 2- Furancarboxaldehyde, 5-methyl- 14.84 %. 4H-pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5- dihydroxyl-6-methyl chiếm 6,67 %. β-sitosterol là một hợp chất phytosterol chiếm 6,63% là một đồng phân của γ-sitosterol.
3.3.3. Trong dung môi etyl axetat
a. Kết quả khảo sát thời gian, tỉ lệ R/L trong quá trình chiết tách:
Điều kiện tiến hành: Bột cơm quả Muồng hoàng yến:10 gam, thể tích EtOAc thay đổilần lượt là: 100, 125, 150, 175, 200ml, thời gian chiết soxhlet:
6, 8, 10,12 h. Cất loại dung môi thu được cao chiết. Các kết quả thu được trình bày trên bảng 3.10.
Bảng 3.10. Ảnh hưởng của thời gian ngâm chiết và thể tích EtOAc đến khối lượng cao chiết
Thế tích
EtOAc (ml) 100 125 150 175 200
Thời gian chiết (giờ)
Khối lượng cao chiết (gam)
0.203 0.362 0.432 0.404 0.493 6 0.315 0.406 0.487 0.518 0.513 8 0.400 0.445 0.536 0.542 0.554 10 0.405 0.519 0.602 0.603 0.611 12 @ Nhận xét:
Qua bảng 3.10 ta thấy, khi thể tích dung môi tăng và thời gian khảo sát tăng thì khối lượng cao chiết cũng tăng dần. Ở tỉ lệ 10g mẫu cơm quả Muồng Hoàng Yến/ 150 ml dung môi EtOAc trong thời gian 12 giờ, khối lượng cao chiết thu được là 0.602g cao hơn khối lượng cao chiết ở tỉ lệ 10g mẫu/ 125ml là 0.519g và nhỏ hơn so với khối lượng cắn ở tỉ lệ 10g mẫu/ 175ml là 0.603g nhưng không đáng kể, đồng thời cũng cao hơn hẳn so với chiết cùng tỉ lệ R/L trong thời gian 10 giờ là 0.536g. Ở những thể tích dung môi lớn hơn nhưng khối lượng cao chiết tăng không đáng kể vì không thể hòa tan thêm các chất trong cơm quả Muồng Hoàng Yến. Vậy tỉ lệ R/L thích hợp để chiết cơm quả
Muồng Hoàng Yến là 10g mẫu / 150ml dung môi EtOAc trong thời gian 12 giờ.
b. Thành phần hóa học trong dịch chiết EtOAc:
Phổ GC-MS của dịch chiết EtOAc từ cơm quả Muồng hoàng yến được thể hiện ở hình 3.4. Kết quả xác định thành phần hóa học trong dịch chiết được tổng hợp ở bảng 3.11
Bảng 3.11. Thành phần hóa học trong dịch chiết EtOAc bằng phương pháp chiết song song
STT RT Area % Name Formula 1 8.096 10.93 4H-pyran-4-one,2,3- dihydro-3,5- dihydroxy-6-methyl (C6H8O4) 2 9,846 25,42 2- Furancarboxaldehyde, 5-methyl- (C6H6O2) 3 13.818 0.41 Caryophyllene (C15H24) 4 27.195 4.63 n-hexadecanoic acid (C16H32O2) 5 31.222 1.69 9- hexadecenoic acid (C16H30O2) 43.386 2.82 β-sitosterol (C29H50O) @ Nhận xét:
6 cấu tử trong dịch chiết EtOAc từ cơm quả Muồng hoàng yến. Thành phần hóa học trong dịch chiết chủ yếu là những cấu tử phân cực trung bình và yếu, các hợp chất terpene, acid béo, dẫn xuất của phenol và phytosterol.
Hợp chất có hàm lượng cao nhất là 2-Furancarboxaldehyde, 5-methyl- chiếm 25, 42%. Các cấu tử có hàm lượng cao tiếp theo là 4H-pyran-4- one,2,3-dihydro 3,5- chiếm 10.93 % và β-sitosterol 2,82%. Hợp chất n- hexadecanoic acid chiếm 4.63%, 9- hexadecanoic acid chiếm 1,69 %. Còn lại là hợp chất terpene có hàm lượng rất thấp 0.41%. Hầu như các chất có trong dịch chiết đã được xác định trong hai dung môi petroleum ether và choloform.
3.3.4. Trong dung môi MeOH
a. Kết quả khảo sát thời gian, tỉ lệ R/L trong quá trình chiết tách:
Điều kiện tiến hành: Bột cơm quả Muồng hoàng yến: 10 gam, thể tích MeOH thay đổi lần lượt là: 100, 125, 150, 175, 200ml thời gian ngâm chiết: 4, 6, 8, 10 ngày. Cất loại dung môi thu được cao chiết. Các kết quả thu được trình bày trên bảng 3.12.
Bảng 3.12. Ảnh hưởng của thời gian ngâm chiết và thể tích MeOH
đến khối lượng cao chiết
Thế tích
MeOH (ml) 100 125 150 175 200
Thời gian chiết (giờ)
Khối lượng cao chiết (gam)
0.652 0.786 0.923 0.953 1.015 6 0.781 0.993 1.045 1.087 1.155 8 0.963 1.089 1.098 1.214 1.233 10 1.022 1.121 1.129 1.232 1.265 12 @ Nhận xét:
Qua bảng 3.12 ta thấy, khi thể tích dung môi tăng và thời gian khảo sát tăng thì khối lượng cao chiết cũng tăng dần. Thời gian chiết và tỉ lệ rắn lỏng thích hợp nhất là 10 giờ với tỉ lệ R/L: 10/175.
b. Thành phần hóa học trong dịch chiết MeOH
Phổ GC-MS của dịch chiết MeOH từ cơm quả Muồng hoàng yến được thể hiện ở hình 3.5. Kết quả xác định thành phần hóa học trong dịch chiết MeOH từ cơm quả Muồng hoàng yến được tổng hợp ở bảng 3.13.
Bảng 3.13. Thành phần hóa học trong dịch chiết MeOH bằng phương pháp chiết song song
STT RT Area % Name Formula 1 4.352 1.85 2-Furancarboxaldehyde, 5-methyl- (C6H6O2) 2 8.081 4.73 4H-pyran-4-one,2,3- dihydro-3,5-dihydroxy-6- methyl- (C6H8O4) 3 9.834 7.43 2-furancarboxaldehyde 5- (hydroxymethyl)- (C6H6O3) 4 27.123 1.41 n- hexadecanoic acid (C16H32O2) 5 43.372 1.06 β-sitosterol (C29H50O)
@ Nhận xét:
Từ kết quảở bảng 3.13 cho thấy phương pháp GC-MS đã xác định được 6 cấu tử trong dịch chiết MeOH từ cơm quả Muồng hoàng yến. Thành phần hóa học trong dịch chiết chủ yếu là những cấu tử có độ phân cực đã được tìm thấy trong các dung môi trên trong đó hợp chất có hàm lượng cao nhất 2-furancarboxaldehyde 5 - (hydroxymethyl) - chiếm hàm lượng 7.43%, 4H – pyran – 4 - one, 2, 3- dihydro - 3, 5 – dihydroxy – 6 –methyl - (4.73%), 2 - Furancarboxaldehyde, 5 –methyl - (1.85%), n - hexadecanoic acid chiếm 1.41% và beta - sitosterol (1,06%).
Bảng 3.14. Thành phần hóa học trong các dịch chiết thu được bằng phương pháp chiết song song
STT Chất Petroleum
ether CHCl3 EtoAc MeOH
1. Heptane,2,2,4,6,6- pentamethyl- (C12H26) (+) (-) (-) (-) 2. 4H-pyran-4-one,2,3-dihydro- 3,5-dihydroxy-6-methyl (C6H8O4) (+) (+) (+) (+) 3. Naphthalene, 1-methy- (C11H10) (+) (-) (-) (-) 4. Hexadecane (C16H34) (+) (-) (-) (-)
5. Ethyl citrate (C12H20O7) (+) (-) (-) (-) 6. n-hexadecanoic acid (C16H32O2) (+) (+) (-) (+) 7. Gamma- sitosterol (C29H50O) (+) (-) (-) (-) 8. 2-Furancarboxaldehyde, 5- methyl- (C6H6O2) (-) (+) (+) (+) 9. 2-furancarboxaldehyde 5- (hydroxymethyl)- (C6H6O3) (-) (-) (-) (+) 10. β-sitosterol (C29H50O) (-) (+) (+) (+) 11. Caryophyllene (C15H24) (-) (-) (+) (-) 12. 9- hexadecanoic acid (C16H30O2) (-) (-) (+) (-) (+) Có sự xuất hiện của cấu tử trong dịch chiết
@ Nhận xét
Từ bảng 3.14 ta nhận thấy phương pháp GC-MS đã xác định được 12 cấu tử khác nhau có trong các dịch chiết của cơm quả Muồng hoàng yến bao gồm ankan 12C÷44C, acid hữu cơ, dẫn xuất phenol, flavonoid, phytosterol và amine dị vòng.
Trong đó:
- Dịch chiết petroleum ether xác định được nhiều cấu tử nhất với 7 cấu tử.
- Dịch chiết chloroform xác định được 4 cấu tử. - Dịch chiết EtOAc xác định được 5 cấu tử. - Dịch chiết MeOH có 5 cấu tử
Hầu như các cấu tử thu được từ các dịch chiết là giống nhau.
3.4. KẾT QUẢ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG CÁC DỊCH CHIẾT BẰNG PHƯƠNG PHÁP CHIẾT LẦN LƯỢT
3.4.1. Thành phần dịch chiết trong petroleum ether
Dịch chiết petroleum ether cơm quả Muồng Hoàng Yến được xác định thành phần hóa học bằng phương pháp GC-MS. Trên sắc kí đồ nhận được sẽ
có các tín hiệu pic ứng với các cấu tử được tách. So sánh thời gian lưu với thư
viện phổ có thể xác định được tên chất và đo diện tích mỗi pic ta xác định
được hàm lượng mỗi chất trong hỗn hợp được nhận diện.
Phổ GC-MS của dịch chiết petroleum ether từ cơm quả Muồng hoàng yến
được thể hiện ở hình 3.6. Kết quả xác định thành phần hóa học trong dịch chiết petroleum ether từ cơm quả Muồng hoàng yến được tổng hợp ở bảng 3.15.
Bảng 3.15. Thành phần hóa học trong dịch petroleum ether bằng phương pháp chiết lần lượt
STT RT Area % Name Formula 1 5.141 0.032 Heptane,2,2,4,6,6- pentamethyl- (C12H26) 2 6.514 0.009 Ethanone, 1-(4-methylphenyl) (C9H10O) 3 13.346 0.14 Tetradecane (C14H30) 4 18.238 0.37 Hexadecane (C16H34)
5 20.759 0.34 Heptadecane (C17H36) 6 25.681 0.98 Nonadecane (C19H40) 7 28.029 1.39 Eicosane (C20H42) 8 30.301 3.08 Heneicosane (C21H44) 9 39.533 2.86 Tetracosane (C24H50) 10 38.301 3.08 Heptadecane,9-octyl- (C25H52) 11 39.533 2.86 Heptancosane (C27H56) 12 40.479 3.9 Tritetracontane (C44H90)
@ Nhận xét:
Từ kết quả ở bảng 3.15 cho thấy phương pháp GC-MS đã xác định được 12 cấu tử trong dịch chiết petroleum ether từ cơm quả Muồng hoàng yến. Thành phần hóa học trong dịch chiết petroleum ether là những cấu tử có độ
phân cực yếu đến không phân cực bao gồm: Các hidrocacbon mạch dài 12C÷ 44C chiếm 19,032 % và hợp chất thơm.
Số cấu tử thu được trong dịch chiết petroleum ether trong phương pháp này nhiều hơn so với phương pháp chiết song song 5 cấu tử. Điều này có thể
lý giải do dung môi ta sử dụng trong quá trình chiết soxhlet song song chứa nhiều tạp chất nên khả năng hòa tan các hợp chất có trong cơm quả Muồng hoàng yến bị giảm xuống dẫn đến số cấu tử được xác định bằng phương pháp GC-MS sẽ ít hơn.
3.4.2. Thành phần dịch chiết trong chloroform
Dịch chiết chloroform cơm quả Muồng Hoàng Yến được xác định thành phần hóa học bằng phương pháp GC-MS. Trên sắc kí đồ nhận được sẽ có các tín hiệu pic ứng với các cấu tử được tách. So sánh thời gian lưu với thư viện phổ có thể xác định được tên chất và đo diện tích mỗi pic ta xác định được hàm lượng mỗi chất trong hỗn hợp được nhận diện.
Phổ GC-MS của dịch chiết chloroform từ cơm quả Muồng hoàng yến
được thể hiện ở hình 3.7.
Kết quả xác định thành phần hóa học trong dịch chiết chloroform từ
Bảng 3.16. Thành phần hóa học trong dịch chiết chloroform bằng phương pháp chiết lần lượt
STT RT Area% Name Formula
1 6.527 0.43 Ethanone ,1-(1H-pyrrol- 2-yl) (C6H7NO) 2 8.110 6.29 4H-pyran-4-one, 2,3- dihydro-3,5-dihydroxyl- 6-methyl (C6H8O4) 3 25.675 1.03 Nonadecane (C19H40) 4 28.023 1.42 Eicosane (C20H42) 5 30.287 1.83 Heneicosane (C21H44) 6 36.009 2.16 Tricosane (C23H48) 7 37.410 2.49 Tetracosane (C24H50) 8 38.296 2.6 Heptadecane,9-octyl- (C25H52) 9 40.009 2.63 Stigmasterol (C29H48O) 10 41.526 1.92 β-sitosterol (C29H50O)
@ Nhận xét:
Từ kết quả ở Bảng 3.16 cho thấy phương pháp GC-MS đã xác định được 10 cấu tử trong dịch chiết chloroform từ cơm quả Muồng hoàng yến.
Chất hữu cơ chiếm hàm lượng cao nhất là 4H-pyran-4-one, 2,3-dihydro- 3,5-dihydroxyl-6-methyl với hàm lượng 6.29% tiếp đến là các hợp chất phytosterol trong đó: stigmasterol (2.63%), Heptadecane,9-octyl- (2.6%),Tetracosane (2.49%) và β-sitosterol (1.92%) cuối cùng là các hydrocacbon mạch dài từ 12 đến 24 C, chiếm hàm lượng tương đối nhỏ
3.4.3. Thành phần dịch chiết trong etyl axetat
Dịch chiết etyl axetat cơm quả Muồng Hoàng Yến được xác định thành phần hóa học bằng phương pháp GC-MS. Trên sắc kí đồ nhận được sẽ có các tín hiệu pic ứng với các cấu tử được tách. So sánh thời gian lưu với thư viện