6. Bố cục đề tài
3.5.3. Dịch chiết etylaxetat
Phổ GC – MS của dịch chiết etyl axetat từ rễ thầu dầu đƣợc thể hiện ở hình 3.12. Kết quả định danh thành phần hóa học trong dịch chiết đƣợc tổng hợp ở bảng 3.15.
Hình 3.12. Sắc ký đồ của dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi etyl axetat Bảng 3.15. Thành phần hóa học dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi etyl
axetat
STT RT Area
% Name Formula Structure
1 64.84 5 11.33 Stigmasterol C29H48O 2 65.54 1 14.63 Gama.- Stitosterol C29H50O
Nhận xét: Kết quả phân tích bằng phƣơng pháp sắc kí khí khối phổ cho thấy trong dịch chiết rễ cây thầu dầu trong dung môi etyl axetat có 32 cấu tử đƣợc xác định, trong đó có 2 cấu tử đƣợc định danh chiếm 25,96%. Trong đó, Stigmasterol chiếm 11,33%, Gama.-Stitosterol chiếm 14,63%.
Cả hai cấu tử đều thuộc nhóm sterol và có hoạt tính sinh học cao cũng nhƣ đƣợc ứng dụng rộng rãi để làm thuốc chữa bệnh ung thƣ và một số bệnh khác.
3.5.4. Dịch chiết methanol
Phổ GC – MS của dịch methanol từ rễ thầu dầu đƣợc thể hiện ở hình 3.13. Kết quả định danh thành phần hóa học trong dịch chiết đƣợc tổng hợp ở bảng 3.16.
Bảng 3.16. Thành phần hóa học dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi methanol
S
TT RT
Area
% Name Formula Structure
1 3.574 0.51 Furfural C5H4O2 2 9.287 1.66 4H-Pyran-4-one, 2,3- dihydro-3,5- dihydroxy-6-methyl- C6H8O4 3 11.019 14.13 2- Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)- C6H6O3 4 12.304 1.51 5-Thiazoleethanol, 4- methyl C6H9NOS 5 25.303 2.04 1,6,10-Dodecatrien-3- ol, 3,7,11-trimethyl- C15H26O 6 56.458 10.83 n-Hexadecanoic acid C16H32O2 7 58.059 1.43 9-Octadecenoic acid (z), methyl ester C19H36O2 8 58.324 12.10 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)- C18H32O2 9 58.374 22.80 9-Hexadecanoic acid C16H30O2 10 58.528 7.00 Octadecanoic acid C18H36O2
Nhận xét: Kết quả phân tích bằng phƣơng pháp sắc kí khí khối phổ cho thấy trong dịch chiết rễ cây thầu dầu trong dung môi mehtanol có 10 cấu tử đƣợc định danh chiếm 74,01%. Trong đó, cấu tử chiếm hàm lƣợng cao là 9- Hexadecanoic acid chiếm 22,80%, 5-(hydroxymethyl)- chiếm 14,13%, 9,12- Octadecadienoic acid (z,z)- chiếm 12,10%, n-Hexadecanoic acid 10,83%, 2- Furancarboxaldehyde.
- Hàm lƣợng các chất trong dịch chiết methanol của rễ cây thầu dầu đƣợc xác định theo phƣơng pháp trọng lƣợng thu đƣợc kết quả:
Bảng 3.17. Hàm lượng các chất trong dịch chiết methanol của rễ thầu dầu
m (g) m0 (g) m1 (g) m1 – m0 (g) %mct
10,0000 68,6672 71,5410 2,8738 28,738
Trong đó: m0: khối lƣợng bình tỉ trọng và dung môi metanol (g) m1: khối lƣợng bình tỉ trọng và dịch chiết trong dung môi metanol (g)
Nhận xét: Bằng phƣơng pháp chiết soxhlet, hàm lƣợng các chất trong
dịch chiết rễ cây thầu dầu thu đƣợc là 2,8738 gam, chiếm 28,738% khối lƣợng mẫu lúc đầu.
Bảng 3.18. Bảng tổng hợp thành phần hóa học các dịch chiết bằng phương pháp soxhlet song song
STT Name % diện tích pic
n- hexan cloroform etyl axetat methanol 1 Cholest-5-ene, 3-ethoxy-, (3.beta. )- 14.85 - - - 2 Stigmasterol - 9.90 11.33 - 3 Gama-Stitosterol - 12.47 14.63 -
4 n-Hexadecanoic - 5.23 - 10.83 5 Furfural - - - 0.51 6 4H-Pyran-4-one, 2,3- dihydro-3,5-dihydroxy-6- methyl- - - - 1.66 7 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)- - - - 14.13 8 5-Thiazoleethanol, 4- methyl - - - 1.51 9 1,6,10-Dodecatrien-3-ol, 3,7,11-trimethyl- - - - 2.04 10 9-Octadecenoic acid (z)-, methyl ester - - - 1.43 11 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)- - - - 12.10 12 9-Hexadecanoic acid - - - 22.80 13 Octadecanoic acid - - - 7.00
Nhận xét: Kết quả phân tích bằng phƣơng pháp sắc kí khí khối phổ cho
thấy trong dịch chiết rễ cây thầu dầu trong các dung môi n-hexan, cloroform, etyl axetat, metanol có 13 cấu tử đƣợc định danh. Trong đó, dung môi methanol là dung môi thu đƣợc số lƣợng cấu tử nhiều nhất.
Stigmasterol, Gama.-Stitosterol là 2 cấu tử có mặt trong cả 2 dịch chiết cloroform và etyl axetat, n-Hexadecanoic là cấu tử có mặt trong cả 2 dịch chiết cloroform và metanol. Tuy nhiên hàm lƣợng mỗi cấu tử trong các dịch chiết là khác nhau.
Sau khi tiến hành chiết soxhlet song song tôi tiếp tục tiến hành chiết soxhlet nối tiếp để xác định xem ngoài những cấu tử đã đƣợc xác định ở 2 phƣơng pháp chiết soxhlet song song và chƣng ninh còn những cấu tử nào
còn chƣa đƣợc định danh hoặc giồng với những cấu tử đã đƣợc xác định nhƣ trên.
3.6. KẾT QUẢ ĐO GC-MS XÁC ĐỊNH THÀNH PHẦN HÓA HỌC TRONG DỊCH CHIẾT RỄ CÂY THẦU DẦU BẰNG PHƢƠNG PHÁP TRONG DỊCH CHIẾT RỄ CÂY THẦU DẦU BẰNG PHƢƠNG PHÁP CHIẾT SOXLET NỐI TIẾP
3.6.1. Dịch chiết n-hexan
Sắc kí đồ GC của dịch chiết n-hexan từ rễ cây thầu dầu đƣợc thể hiện ở hình 3.14, thành phần hóa học dịch chiết rễ cây thầu dầu trong dung môi methanol đƣợc thể hiện ở bảng 3.19
Bảng 3.19. Thành phần hóa học của dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi n- hexan
S
TT RT
Area
% Name Formula Structure
1 64.848 15.24 Stigmasterol C29H48O
2 65.547 20.14 Gama.-
Stitosterol C29H50O
Nhận xét: Từ sắc kí đồ GC ở hình 3.14 và bảng 3.19 thành phần hóa
học dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi n-hexan ta thấy có 2 cấu tử đƣợc định danh chiếm 35,38%, còn 64,62% cấu tử chƣa đƣợc định danh. Trong đó cấu tử Stigmasterol chiếm 15,24%, Gama.-Stitosterol chiếm 20,14%.
3.6.2. Dịch chiết methanol
Sắc kí đồ GC của dịch chiết methanol từ rễ cây thầu dầu đƣợc thể hiện ở hình 3.15, thành phần hóa học dịch chiết rễ cây thầu dầu trong dung môi methanol đƣợc thể hiện ở bảng 3.20
Hình 3.15. Sắc kí đồ GC của dịch chiết methanol từ rễ cây thầu dầu Bảng 3.20. Thành phần hóa học của dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi
methanol
ST
T RT Area % Name Formula Structure
1 9.343 9.37 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5- dihydroxy-6- methyl- C6H8O4 2 11.082 23.95 2- Furancarboxaldeh yde, 5- (hydroxymethyl)- C6H6O3 3 21.712 3.16 Butylated Hydroxyltoluen C15H24O
4 56.404 2.66 n-Hexadecanoic
acid C16H32O2
5 58.516 0.73 Octadecanoic acid C18H36O2
Nhận xét: Từ sắc kí đồ GC ở hình 3.15 và bảng 3.20 thành phần hóa
học dịch chiết rễ thầu dầu trong dung môi methanol ta thấy có 5 cấu tử đƣợc định danh chiếm 39,87%, còn 60,13% cấu tử chƣa đƣợc định danh. Trong đó cấu tử 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- chiếm 9,37%, Butylated Hydroxyltoluen chiếm 3,16%, 2-Furancarboxaldehyde, 5- (hydroxymethyl)- chiếm 23,95%, n-Hexadecanoic acid chiếm 2,66%, Octadecanoic acid chiếm 0,73%. Trong 2 dịch chiết chlorofom và etyl axetat thì không có cấu tử nào đƣợc định danh.
3.7. SO SÁNH CÁC THÀNH PHẦN HÓA HỌC ĐƢỢC XÁC ĐỊNH TRONG CÁC DUNG MÔI KHÁC NHAU BẰNG PHƢƠNG PHÁP CHƢNG NINH, CHIẾT SOXHLET SONG SONG VÀ NỐI TIẾP
- Phƣơng pháp chƣng ninh có 22 cấu tử đƣợc định danh, trong đó: Stigmastanol chiếm tỉ lệ ít nhất 0,26%, 3-Pyridinecarbonitrile, 1,2-dihydro- 4-methoxy-1-methyl-2-oxo- chiếm tỉ lệ lớn nhất 94,51%. Dung môi n-hexan là dung môi thu đƣợc số lƣợng cấu tử nhiều nhất. Một số cấu tử không đƣợc định danh trong phƣơng pháp chƣng ninh: 9-Hexadecanoic acid, Cholest-5- ene, 3-ethoxy-, (3.beta. )-, 2- Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)-, 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)-, 9-Octadecenoic acid (z)- methyl ester, 1,6,10-Dodecatrien-3-ol, 3,7,11-trimethyl-, Butylated Hydroxyltoluen, 2-
Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)-, 5-Thiazoleethanol, 4-methyl nhƣng đƣợc định danh ở phƣơng pháp chiết soxhlet song song và nối tiếp.
- Phƣơng pháp chiết soxhlet song song có 13 cấu tử đƣợc định danh, trong đó: Furfural chiếm tỉ lệ ít nhất 0,51%, 9-Hexadecanoic acid chiếm tỉ lệ lớn nhất 22,80%. Dung môi methanol là dung môi thu đƣợc số lƣợng cấu tử nhiều nhất. Một số cấu tử không đƣợc định danh trong phƣơng pháp chiết
soxhlet song song: 1-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)-, 1,2-
Benzenedicarboxylic acid, mono(2-ethylhexyl) ester, Vitamin E, 9,12,15- Octadecatrienoic acid, (z,z,z)-, 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)-methyl ester, Phytol, Heptadecanoic acid, 1,2-dihydro-4-methoxy-1-methyl-2-oxo-, Ethanone, Campesterol, 3-Pyridinecarbonitrile, 2,5-Furandicarboxaldehyde, 2-Furandicarboxylic acid, hydrazide, butyl-2-ethylhexyl ester, 1,2,3- Benzenetriol, Benzenedicarboxylic acid, 2-Furandicarboxaldehyde, Butylated Hydroxyltoluen, Stigmastanol nhƣng đƣợc định danh trong phƣơng pháp chƣng ninh và nối tiếp.
- Phƣơng pháp chiết soxhlet nối tiếp có 7 cấu tử đƣợc định danh, trong đó: 2- Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)- chiếm tỉ lệ lớn nhất 23,95%, Octadecanoic acid chiếm tỉ lệ ít nhất 0,73%. Dung môi methanol là dung môi thu đƣợc số lƣợng cấu tử nhiều nhất. Còn 2 dung môi etylaxetat và chlorofom không có cấu tử nào đƣợc định danh. Một số cấu tử không đƣợc định danh trong phƣơng pháp chiết soxhlet nối tiếp: 1-(2-hydroxy-4-methoxyphenyl)-, 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono(2-ethylhexyl) ester, 9,12,15- Octadecatrienoic acid, (z,z,z)-, 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)-methyl ester, Phytol, Heptadecanoic acid, 1,2-dihydro-4-methoxy-1-methyl-2-oxo-, Campesterol, Benzenedicarboxylic acid, Stigmastanol, 3-Pyridinecarbonitrile, Ethanone, 2,5-Furandicarboxaldehyde, 2-Furandicarboxylic acid, hydrazide, 9,12-Octadecadienoic acid (z,z)-, butyl-2-ethylhexyl ester, 1,2,3-Benzenetriol,
2-Furandicarboxaldehyde, Furfural, Vitamin E, methyl ester, 9-Octadecenoic acid (z)-, 2- Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)-, Cholest-5-ene, 3- ethoxy-, (3.beta. )-, Butylated Hydroxyltoluen, 2- Furancarboxaldehyde, 5- (hydroxymethyl)-, 1,6,10-Dodecatrien-3-ol, 3,7,11-trimethyl-, 5- Thiazoleethanol, 4-methyl, 9-Hexadecanoic acid nhƣng đƣợc định danh trong phƣơng pháp chƣng ninh và song song.
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 1. KẾT LUẬN
Quá trình nghiên cứu thực nghiệm chúng tôi rút ra các kết luận sau:
1.1. Xác định đƣợc một số chỉ tiêu hóa lý
- Độ ẩm của rễ thầu dầu: 8,45%
- Hàm lƣợng tro của rễ thầu dầu: 7.57%
- Hàm lƣợng kim loại: Kết quả hàm lƣợng kim loại có trong rễ cây thầu dầu thấp hơn so với hàm lƣợng tối đa cho phép theo căn cứ quyết định của Bộ Y tế số 46/2007/QĐ – BYT ngày 19 tháng 12 năm 2007 của Bộ trƣởng Bộ Y tế về việc ban hành qui định giới hạn tối đa ô nhiễm sinh học và hóa học trong thực phẩm với hàm lƣợng các kim loại nặng cho phép trong thực phẩm (rau, quả, chè và các sản phẩm chè.
1.2. Kết quả khảo sát ảnh hƣởng của các điều kiện chiết tách các hợp chất trong rễ cây thầu dầu bằng dung môi methanol theo phƣơng pháp chƣng ninh.
Nhiệt độ: 800C, Thời gian: 4h , Tỷ lệ rắn-lỏng: 1:10 (g/ml), Số lần chiết: 3 lần thu đƣợc 2,13 gam.
1.3. Thành phần hóa học của các dịch chiết rễ thầu dầu trong các
dung môi bằng phƣơng pháp chƣng ninh
Bằng phƣơng pháp GC – MS có 22 cấu tử trong các dịch chiết từ rễ cây thầu dầu. Trong đó: dịch chiết n-hexan có 13 cấu tử chiếm 82.18%, dịch chiết chloroform có 2 cấu tử chiếm 95.75%, dịch chiết etylaxetat có 3 cấu tử chiếm 100%, dịch chiết methanol có 6 cấu tử chiếm 43.82%
1.4. Thành phần hóa học của dịch chiết trong các dung môi khác nhau bằng phƣơng pháp soxhlet song song
Bằng phƣơng pháp GC – MS có 13 cấu tử trong các dịch chiết từ rễ thầu dầu. Trong đó, Stigmasterol, Gama.-Stitosterol là 2 cấu tử có mặt trong
cả 2 dịch chiết chloroform và etyl axetat, n-Hexadecanoic là cấu tử có mặt trong cả 3 dịch chiết chloroform, etyl axetat và methanol. Tuy nhiên hàm lƣợng mỗi cấu tử trong các dịch chiết là khác nhau.
1.5. Thành phần hóa học của dịch chiết trong các dung môi khác nhau bằng phƣơng pháp soxhlet nối tiếp
Bằng phƣơng pháp GC – MS đã định danh đƣợc 7 cấu tử trong các dịch chiết từ rễ thầu dầu. Trong đó các cấu tử có mặt trong 2 dịch chiết n-hexan và methanol, tuy nhiên hàm lƣợng mỗi cấu tử trong các dịch chiết là khác nhau. Trong 2 dịch chiết còn lại là chlorofom và etyl axetat thì không có cấu tử nào đƣợc xác định.
2. KIẾN NGHỊ
Do thời gian và điều kiện có hạn nên các kết quả nghiên cứu trên mới là những kết quả khảo sát bƣớc đầu về thành phần hóa học của rễ thầu dầu. Chúng tôi mong muốn thời gian tới sẽ có những nghiên cứu thêm về thành phần hóa học, phân lập chất có tính sinh học của các bộ phận khác trong cây thầu dầu để mở rộng các ứng dụng vào thực tiễn.
DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt
[1] Trịnh Đình Chính, Nguyễn Thị Bích Tuyết (2003), Giáo trình hợp chất tự nhiên, Đại học Huế
[2] Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985), Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thuốc, NXB Y học, T.P Hồ Chí Minh.
[3] Nguyễn Văn Đàn (1997), Các phương pháp nghiên cứu cây thuốc, NXB Y – Dƣợc, T.P Hồ Chí Minh.
[4] Lê Văn Đăng (2005), Chuyên đề một số hợp chất thiên nhiên, NXB Đại học quốc gia T.P Hồ Chí Minh
[5] Phạm Hoàng Hộ (1980), Cây cỏ Việt Nam, tập 1, NXB Giáo dục. [6] Phạm Thanh Kì, Dược liệu học (tập II) sách đào tạo dược sĩ đại học [7] Đỗ Tất Lợi (1999), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản
Y học.
[8] Nguyễn Thị Kim Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ,
NXB Đại Học Quốc gia TP Hồ Chí Minh
[9] Bùi Xuân Vững, Giáo trình hóa phân tích công cụ, Tài liệu chuyên ngành hóa, Đại học Đà Nẵng
[10] Nguyễn Đức Huệ (2005), Các phương pháp phân tích hữu cơ, NXB Y học
Tiếng Anh
[11] Abhishek Mathur, Satish K. Verma, Sajad Yousuf, Santosh K. Singh, GBKS Prasad and V. K. Dua, 2011. Antimicrobial potential of roots of Riccinus communis against pathogenic microorganisms. International Journal of Pharma and Bio Sciences.
Trang web [12] http://en.wikipedia.org/wiki/Ricin [13] http://botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=1129 [14] http://duocthaothucdung.blogspot.com/2011/12/riin-cay-thau-dau-hay- %C4%91u%C4%91ut%C3%ADa.html [15] http://www.thuocvuonnha.com/c/hat-thau-dau-co-the-chua-benh-tri-va- kiet-ly/thuoc-vuon-nha [16] http://giupban.com.vn/suc-khoe/tac-dung-chua-benh-cua-cay-thau-dau- d34625.html [17] http://www.thaythuoccuaban.com/chedoan/dongkinh.html [18] http://en.wikipedia.org/wiki/Stigmasterol [19] http://tai-lieu.com/tai-lieu/phuong-phap-hap-thu-phan-tu-uv-vis-1095/ [20]http://www.xnkhoachat.com/2012/06/acid-stearic-cong-dung-acid- stearic.html
[21] http://www.botanyvn.com. Trung tâm dữ liệu Việt Nam. [22] http://thalassemia.vn/tin-tuc/suc-khoe-doi-song/thong-tin-y- duoc/%E2%80%9D-cua-ricin-4569.aspx [23] http://moli.vn/content/de-co-doi-mi-dai-cong-voi-dau-thau-dau.html [24] http://mji.ui.ac.id/journal/index.php/mji/article/view/1085 [25] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21658378 [26] http://en.wikipedia.org/wiki/campesterol [27] http://en.wikipedia.org/wiki/Paeonol [28] http://en.wikipedia.org/wiki/Palmitic_acid [29] http://en.wikipedia.org/wiki/Linoleic_acid [30] http://encyclopedia2.thefreedictionary.com/Phytol.
PHỤ LỤC
4. Phổ MS của n-Hexadecanoic và phổ đối chứng của chúng
7. Phổ MS của 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- và phổ đối chứng
14. Phổ MS của 1,2-Benzenedicarboxylic acid,butyl-2-ethylhexylester và phổ đối chứng
17. Phổ MS của 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono(2-ethylhexyl) ester và phổ đối chứng
18. Phổ MS của 4H-Pyran-4-one, 2,3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-methyl- và phổ đối chứng
21. Sắc kí đồ MS của 2-Furancarboxaldehyde, 5-(hydroxymethyl)- và phổ đối chứng
25. Phổ MS của Cholest-5-ene, 3-ethoxy-, (3.beta. )- và phổ đối chứng