6. Bố cục của luận văn
2.2.2. Phương pháp tinh chế berberin clorid và kiểm tra chất lượng
Quá trình tinh chế berberin clorid được tiến hành qua nhiều công đoạn, mỗi công đoạn có nhiều điều kiện và yếu tố kỹ thuật khác nhau.
a. Phương pháp xác định độ tan của berberin trong dung môi tinh chế
* Nguyên tắc: thực hiện các thí nghiệm ở cùng điều kiện nhiệt độ và khuấy trộn khi cân chính xác 1 lượng nguyên liệu Berbrin clorid cho vào một thể tích dung môi cần tinh chế để thu được một loạt các dung dịch bão hòa. Lọc dịch thu được và tiến hành định lượng xác định hàm lượng hoạt chất tan trong dung dịch bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao hoặc bằng phương pháp quang phổ hấp thụ.
* Tiến hành: chuẩn bị 3 mẫu cân, cân chính xác mỗi mẫu 1 gam nguyên liệu Berberin clorid ban đầu lần lượt cho vào 3 bình nón 250ml, thêm 100 ml mỗi loại dung môi vào bình nón 250ml đó. Tiến hành lắc trên thiết bị lắc ngang với tốc độ 60 lần trên phút, điều kiện nhiệt độ phòng. Sau 5 giờ, 6 giờ, 7 giờ, lọc lấy dịch lọc, hút chính xác 1ml dịch lọc cho vào bình định mức 50ml, thêm dung môi pha động đến vạch. Lọc qua màng 0,45 μm rồi tiến hành định lượng bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao hoặc phương pháp quang phổ UV-Vis.
Sử dụng kết quả phân tích để chọn dung môi dùng tinh chế.
b. Tinh chế
Từ nguyên liệu berberin 50% tiến hành tinh chế bằng cách kết tinh lại trong nước hoặc ethanol, tẩy màu bằng than hoạt tính. Sơ đồ tinh chế được trình bày ở Hình 2.1.
Hình 2.1. Sơ đồ quy trình tinh chế berberin clorid bằng ethanol
Qua tham khảo tài liệu và tiến hành một số thí nghiệm sơ bộ tôi nhận thấy
Nguyên liệu Berberin clorid (50 %) -Nước cất nóng 600C
-Than hoạt tính
-Khuấy
-Siêu âm tầng số 50Hz
Dịch lọc
Tủa Berberin clorid
-Kết tinh -Lọc chân không -Sấy Bỏ bã thực hiện 2 lần NaCl rắn (1%) Bỏ dịch lọc -Cồn tuyệt đối
-Than hoạt tính, nhiệt độ
Dịch lọc Bỏ bã
Berberin clorid khan
thực hiện 3 lần
berberin có thể được tinh chế bằng cách tẩy màu bằng than hoạt tính và kết tinh lại trong ethanol. Vì vậy, tôi tiến hành tinh chế berberin theo phương pháp kết tinh lại trong dung môi ethanol 96%, nước cất.
Tiến hành theo các bước như sau:
- Bước 1: Cân chính xác 2,0 gam nguyên liệu berberin clorid thô hòa tan trong
200 ml dung môi. Thêm 0,1 gam than hoạt tính. Đun hồi lưu cách thủy ở 80 0C trong
30 phút. Song song chuẩn bị dung môi tinh chế ở cùng điều kiện nhiệt độ. Tiến hành lọc nóng trên phễu Buchner để loại than hoạt tính, tráng dụng cụ bằng 100 ml dung môi. Tiến hành cất cô quay chân không đến khi thể tích trong bình thủy tinh còn lại khoảng 200ml. Đậy kín bình thủy tinh có dịch tinh chế bằng màng nilon, để kết tinh qua đêm ở ngăn mát của tủ lạnh hoạt động. Lọc lấy tinh thể trên phễu Buchner. Sấy tinh thể trong tủ sấy áp suất giảm ở 800C trong 12 giờ. Xác định hàm lượng berberin clorid trong sản phẩm tinh chế theo phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao. Thí nghiệm được lặp lại 2 lần, lấy kết quả trung bình.
c. Kiểm tra chất lượng sản phẩm sau tinh chế.
Sản phẩm sau khi tinh chế được kiểm tra chất lượng theo tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam IV và đo phổ hồng ngoại.