6. Bố cục của luận văn
2.2.7. Phương pháp thử hoạt tính sinh học
Thử nghiệm hiệu quả ức chế sinh trưởng vi sinh vật của mẫu nano berberin
với hai loại vi khuẩn E.coli và Staphylococcus được tiến hành trên đĩa Lysogeny
broth (LB) đặc. Sử dụng 6 đĩa LB đặc cho thí nghiệm này, 3 đĩa nuôi E.coli và 3 đĩa
nuôi Staphylococcus thử nghiệm khả năng kháng khuẩn nano bernerin bằng đặt mẫu
giấy tẩm 50 microlit hoạt chất (hoặc phương pháp đục lỗ, nhỏ vào mỗi lỗ 50µl nano berberin) và nuôi cấy sau 12 giờ ở buồng nuôi cấy, nhằm tìm ra mẫu nano berberin có tính ức chế sinh trưởng vi sinh vật mạnh hơn, để tiếp tục sử dụng mẫu đó cho các thí nghiệm tiếp theo.
Thực hiện các thí nghiệm đối chứng hoạt tính ức chế sinh trưởng vi sinh vật giữa hỗn dịch nano berberin, các mẫu dược phẩm chứa berberin, với chất kháng sinh
penicilin trên các chủng vi sinh vật Escherichia coli BL21 (gram-), Escherichia coli
XL1 Blue (gram-), Bacillus licheniformis (gram +). Các bước tiến hành thí nghiệm:
Cấy trải vi khuẩn
+ Sử dụng pipet cho 200 µl dịch khuẩn lên bề mặt đĩa LB agar đặc.
+ Sử dụng que cấy trải (đã khử trùng) để trải đều vi khuẩn ra toàn bộ mặt đĩa.
+ Kết thúc cấy trải.
Phương pháp đục lỗ
+ Sau khi cấy trải vi khuẩn, sử dụng dụng cụ để đục 1 lỗ nhỏ tại tâm đĩa
+ Dùng pipet nhỏ 50µl nano berberin vào lỗ đợi 15 phút cho nano berberin
khuếch tán ra toàn bộ mặt đĩa.
Cho vào tủ nuôi qua đêm ở nhiệt độ 370C
Phương pháp đặt mẫu giấy tẩm hoạt chất
+ Sau khi cấy trải vi khuẩn, sử dụng mẫu giấy lọc đường kính 0,5cm đã tẩm
50µl nano berberin đặt lên bề mặt thạch. Theo thời gian thì hoạt chất khuếch tán ra
toàn bộ mặt đĩa. Cho vào tủ ấm qua đêm ở nhiệt độ 370C.