6. Bố cục của luận văn
2.2.5. Phương pháp định lượng berberin trong mẫu nghiên cứu
Để thực hiện các phép định lượng hàm lượng berberin một cách đúng phương pháp theo DĐVN III, phù hợp với các thí nghiệm diễn ra nhanh, liên tục theo thời gian và phù hợp với quy môi thực nghiệm. Tôi tiến hành định lượng hàm lượng berberin trong chế phẩm nghiên cứu theo phương pháp quang phổ UV- Vis.
Cách tiến hành như sau:
-Pha dung môi: Cân chính xác 1 gam Tween 80, 1 gam chất diện hoạt cho vào bình định mức 1000ml, thêm 200ml nước cất tiến hành đánh siêu âm cho tan, sau đó thêm nước cất đến vạch, lắc đều.
- Dung dịch thử: cân chính xác lượng chế phẩm nghiên cứu chứa khoảng 50 mg berberin clorid cho vào bình định mức 250ml, làm ẩm bằng 5ml nước cất, sau đó thêm 100ml dung môi, đánh siêu âm khoảng 30 phút, thêm dung môi đến vạch, lắc đều được dung dịch 1. Hút chính xác 5ml dung dịch 1 cho vào bình định mức 100ml, pha loãng với dung môi đến vạch mức, được dung dịch thử (nồng độ 0,01mg/ml).
- Dung dịch chuẩn: tiến hành tương tự như pha dung dịch thử nhưng thay chất nghiên cứu bằng 50 mg chất chuẩn.
Mẫu trắng: dung môi pha mẫu.
Tiến hành đo độ hấp thụ của dung dịch thử và dung dịch chuẩn trong cùng điều kiện tại bước sóng cực đại 353 ± 1 nm, cốc đo dầy 1cm.
Công thức tính toán hàm lượng hoạt chất berberin có trong mẫu nghiên cứu ứng với độ ẩm thực tế của mẫu thử.
% 100 * * * * (%) Cc mt Ac mc At X Trong đó: - At là độ hấp thu mẫu thử
- Ac là độ hấp thu mẫu chuẩn
- mt là khối lượng mẫu thử
- mc là khối lượng mẫu chuẩn
- Cc là hàm lượng chất chuẩn đối chiếu.
Nếu xác định được độ ẩm của mẫu nghiên cứu thì ta có thể tính được hàm lượng hoạt chất nguyên trạng theo công thức:
Hàm lượng nguyên trạng (%)= X* 100/(100- độ ẩm).