[Colifom được xác định theo NMKL No 44, 6thEd. 2004]. 1. Mục đích áp dụng
Phương pháp này được(tham chiếu theo NMKL số 44 tái bản lần thứ 6 năm 2004) áp dụng cho tất cả các loại thực phẩm để xác định Coliforms tổng số.
2. Định nghĩa
Trong phương pháp này Coliforms được hiểu là những vi khuẩn cho khuẩn
lạc điển hình trên mơi trường thạch Violet Red Bile (VRB) ở 370C trong 24 giờ. Trong trường hợp nghi ngờ, vi khuẩn sẽ được khẳng định trong mơi trường canh Brilliant Green Bile Salt Lactose, Coliforms sẽ sinh khí trong mơi trường này trong 24 giờ ở 370C.
3. Nguyên tắc
Cấy lượng mẫu đã xác định lên mơi trường rắn chọn lọc (thạch Violet Red Bile). Ủ ở 37 0C trong 48 giờ. Đếm các khuẩn lạc điển hình và khẳng định bằng test phù hợp.
4. Dung dịch pha loãng và mơi trường nuơi cấy - Dung dịch pha lỗng: nước cất vơ trùng.
- Mơi trường cấy: thạch Violet Red Bile (VRB) và canh Brilliant Green Bile Lactose (BGBL).
Thự hiện pha mơi trường theo hướng dẫn HB – LAB 5.4/04 - Sổ tay pha chế hĩa chất phịng thí nghiệm. 5. Thiết bị - Máy vortex. - Nồi hấp tiệt trùng. - Tủ ấm 37.0± 1.00C. - Ống Durham.
6. Quy trình 6.1 Chuẩn bị mẫu
Chuẩn bị mẫu và pha lỗng (tham chiếu theo NMKL91). 6.2 Đổ đĩa
Cấy lần lượt 1 ml nồng độ ban đầu và 1 ml cĩ nồng độ 10-1 vào 2 đĩa Petri. Thêm 10 -15 ml mơi trường thạch VRB đã được làm nguội ở 450C. Trộn đều mẫu bằng cách xoay trịn đĩa theo chiều và ngược chiều kim dồng hồ. Sau khi mơi trường đơng, thêm một lớp mỏng mơi trường thạch VRB lên đĩa.
6.3 Nuơi ủ
Các đĩa được lật ngược và ủ ở 37.0 ±1.00C trong 48h.
6.4 Đọc kết quả: đếm các đĩa cĩ số khuẩn lạc dưới 100. Khuẩn lạc Coliforms điển hình cĩ màu đỏ sậm, đường kính lớn hơn hoặc bằng 0.5 mm và được bao quanh vùng kết tủa màu đỏ.
6.5 Khẳng định
Cấy ít nhất 5 khuẩn lạc nghi ngờ của mỗi loại đặc trưng và khơng đặc trưng trong mơi trường canh Brilliant Green Bile Lactose, ủ ở 37.0± 1.00C trong 24±3 giờ và ống mơi trường nào xuất hiện khí thì xem như phản ứng dương tính (tồn bộ phần uốn cong của ống Durham đầy khí)
6.6 Báo kết quả
Chọn các đĩa cĩ số khuẩn lạc ít hơn 100 để đếm. Kết quả đếm Coliforms
trong 1dm2 bằng cách nhân số khuẩn lạc đã đếm với nồng độ pha lỗng và tỉ lệ xác định.
Trong trường hợp khơng cĩ khuẩn lạc điển hình hay tỉ số khẳng định bằng 0, thì kết quả được báo cáo là 0.
2.2.4.2. Phương pháp định lượng Staphylococcus aureus [12] (NMKL 66. 4th - 2008)