Sắc ký lỏng là quá trình tách xảy ra trên cột tách với pha tĩnh là chất rắn và pha động là chất lỏng (sắc ký lỏng - rắn). Mẫu phân tích đƣợc chuyển lên cột tách dƣới dạng dung dịch. Khi tiến hành chạy sắc ký, các chất phân tích đƣợc phân bố liên tục giữa pha động và pha tĩnh. Trong hỗn hợp các chất phân tích, do cấu trúc phân tử và tính chất lí hoá của các chất khác nhau, nên khả năng tƣơng tác của chúng với pha tĩnh và pha động khác nhau. Do vậy, chúng di chuyển với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau[15].
Về cơ bản, LC-MS/MS nhƣ các thiết bị sắc ký khác, thiết bị HPLC bao gồm 3 phần chính:
- Phần đầu là bình chứa dung môi pha động: có 4 bình chứa 4 loại dung môi khác nhau. Tùy thuộc vào cấu tạo bơm 2 kênh hoặc bơm 4 kênh kết hợp với chế độ chạy isocratic hoặc gradien mà có thành phần pha động mong muốn.
- Phần tách: là phần trung gian của hệ sắc ký bao gồm cột tách và cột phụ trợ (tiền cột), buồng điều nhiệt cột, bộ phận bơm mẫu tự động. Mẫu phân tích đƣợc bộ
30
phận bơm mẫu tự động nạp vào hệ thống với dung tích ( cỡ µl) tùy thuộc khả năng cột tách.
- Phần phát hiện và xử lí số liệu: Ở đây hệ thống HPLC thông thƣờng bao gồm các detector, phần khuếch đại tín hiệu, phần chuyển đổi tín hiệu tƣơng tự sang tín hiệu số. Máy tính sẽ lƣu trữ dữ liệu nhận đƣợc và phần mềm xử lí số liệu ( tùy thuộc từng hãng theo thiết bị) cho các kết quả phân tích.
Sắc ký lỏng hiệu năng cao bao gồm nhiều phƣơng pháp có đặc thù riêng, đó là sắc ký lỏng pha liên kết; sắc ký trao đổi ion; sắc ký cặp ion, sắc ký điện di mao quản; sắc ký phân bố lỏng-lỏng; sắc ký rây phân tử...Phƣơng pháp đƣợc sử dụng rộng rãi nhất là sắc ký lỏng pha liên kết.