Trong phân tích lƣợng vết, cơ chất thực vật có ảnh hƣởng trực tiếp đến kết quả phân tích. Làm sạch là giai đoạn quan trọng phải đảm bảo mẫu chạy ổn định, nhiễu nền ít ảnh hƣởng đến kết quả và tránh làm bẩn làm hỏng với detecter cho hệ MS/MS vốn rất nhạy. Các chất làm sạch đƣợc lựa chọn phải đáp ứng hấp phụ cơ chất thực vật nhƣng không hấp phụ hoạt chất cần phân tích. Các chất làm sạch đƣợc lựa chọn là :
- Than hoạt tính GCB : dùng khử các chất diệp lục, chất tạo mầu
- Bột C18EC : dùng khử các chất béo, lipid, protein...
- QuEchERS EN 15662 sử dụng chất làm sạch PSA (Primary-secondary amine - chất hấp phụ amin bậc 1,2)
Thực nghiệm cho thấy GCB hiệu quả làm sạch cơ chất cao nhƣng hầu nhƣ hấp thụ hầu hết HCBVTV trong nghiên cứu. Với mẫu rau nhƣ cải bắp, dƣa chuột, thanh long màu cơ chất giảm đi rõ rệt. Vì vậy chúng tôi không chọn GCB trong nghiên cứu này, thay vào đó, chúng tôi chọn PSA, vì PSA không hấp thụ các HCBVTV trong nghiên cứu này. Bằng cảm quan và xem xét tín hiệu đƣờng nền của phổ chúng tôi chọn lƣợng MgSO4 và PSA lần lƣợt 4g; 0,3g để làm sạch mẫu sau đó nghiên cứu các điều kiện chiết HCBVTV ra khỏi mẫu .
Khảo sát ảnh hƣởng thể tích 5% acid formic đến hiệu suất thu hồi
Cân 10 g/mẫu đối chứng dƣa chuột (cân 7 lƣợng cân), thêm 0,1 ml dung dịch chuẩn Mix 7 1000 ng/ml vào mỗi mẫu, sau đó thêm 10 ml ACN. Thêm các thể tích acid formic khác nhau nhƣ ở bảng 3.7 vào 2 ml dịch chiết cuối cùng trƣớc khi bơm vào máy. Xử lý mẫu với quy trình chiết ở trên rồi bơm vào hệ thống HPLC – MS/MS chạy các điều kiện tối ƣu đã khảo sát ở trên. Nồng độ mẫu thêm chuẩn thu đƣợc tính theo đƣờng chuẩn.
61
Bảng 3.7: Ảnh hƣởng Vacid formic đến hiệu suất thu hồi trên mẫu thêm chuẩn
m (g) Vacid formic (μl) Số ml chuẩn 1000 (ng/ml) thêm vào ồng độ chuẩn thêm vào (ng/ml) Hiệu suất thu hồi (%) 10 0 0,1 10 66,4 10 2 0,1 10 73,2 10 5 0,1 10 86,4 10 10 0,1 10 83,6 10 25 0,1 10 33,6 10 20 0,1 10 13,0 10 25 0,1 10 10,2
Từ các số liệu bảng 3.8, ta thấy khi thêm 10 µl axit formic vào 10 ml dịch mẫu thì hiệu suất chiết đạt giá trị cực đại và pic sắc ký của mẫu spike và chuẩn tƣơng tự nhau (hình 3.7, 3.8).
62
Hình 3.7: Sắc ký đồ EIC và phổ khối của mẫu thêm chuẩn tại 10 ng/ml
Hình 3.8: Sắc ký đồ EIC và phổ khối của chuẩn Fluoxastrobin tại 10 ng/ml