3.2. ảnh hưởng của môi trường và các chất điều hoà sinh trưởng đến nhân chồ
3.2.1. Xác định mơi trường ni cấy thích hợp
Trong nhân giống in vitro, môi trường nuôi cấy là nguồn cung cấp các
chất dinh dưỡng cần thiết cho cây trong cả quá trình. Do các mẫu vật khi bị tách rời khỏi cây mẹ khơng cịn khả năng tự dưỡng, nếu khơng tiếp tục cung cấp chất dinh dưỡng thì chúng sẽ chết. Để tồn tại, tiếp tục phân hoá và phát triển trong điều kiện in vitro, chúng cần phải được cung cấp đầy đủ các chất
dinh dưỡng cần thiết cho sự sống của mô tế bào thực vật.
Khả năng tái sinh và phát triển của chồi trong quá trình ni cấy in vitrolà nhân tố quan trọng quyết định đến sự thành bại và tốc độ của việc ứng dụng quy trình nhân giống in vitro cho một đối tượng. Tuy nhiên, khả năng này không những phụ thuộc từng lồi, từng dịng và giai đoạn tuổi của từng đối tượng cụ thể mà cịn phụ thuộc vào mơi trường ni cấy. Chính vì thế, đề tài đã tiến hành thí nghiệm để tìm ra mơi trường tái sinh chồi phù hợp nhất cho loài Tếch.
Hệ số nhân chồi của Tếch phụ thuộc rất nhiều vào mơi trường ni cấy bao gồm hàm lượng khống, các Vitamin và các chất điều hoà sinh trưởng… các nghiên cứu giai đoạn này nhằm tìm ra mơi trường thích hợp nhất cho q trình nhân chồi. Việc xác định mơi trường nuôi cấy cho một đối tượng được dựa trên cơ sở xem xét về nhu cầu dinh dưỡng cho từng nhóm lồi cây nhất định. Tếch thuộc nhóm lồi cây gỗ phát triển nhanh nên đề tài đã tiến hành chọn thử nghiệm 3 môi trường thường dùng trong nhân giống đó là mơi trường MS, WPM và mơi trường B5. Các mơi trường này có sự khác nhau về thành phần và hàm lượng các chất dinh dưỡng khoáng đa lượng, vi lượng và vitamin (phụ lục 01). Trên cơ sở quan sát hệ số nhân chồi, chiều dài chồi và số lá của
mẫu cấy ban đầu để so sánh đánh giá để tìm ra mơi trường thích hợp cho cây Tếch. Kết quả được tổng hợp ở phụ biểu 04 và bảng 3.3.
Bảng 3.3: ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tái sinh chồi
Tếch (sau 4 tuần).
Môi trường Hệ số nhân (lần) Chiều dài chồi (cm) Số lá/chồi
MS 1,73 5,09 6,33 WPM 2,10 4,45 5,75 B5 1,56 3,51 4,75 F 17,039 68,095 7,656 SigF 0,000 0,000 0,002 1.732.101.56 5.09 4.45 3.51 6.33 5.75 4.75 0.00 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00
He so nhan Chieu dai choi So la
Chỉ tiêu
MS WPM B5
Hình 3.2: Biểu đồ ảnh hưởng của mơi trường nuôi cấy đến khả năng tái sinh chồi của Tếch
Kết quả cho thấy việc sử dụng các môi trường khác nhau có ảnh hưởng đến hệ số nhân, chiều dài chồi và số lá của các chồi Tếch trong ống nghiệm. Kết quả phân tích phương sai cho thấy sự sai khác về các chỉ tiêu này là hết
sức rõ rệt, xác suất F tính của hệ số nhân chồi, chiều cao chồi cũng như số lá/chồi đều nhỏ hơn 0,05.
Trong 3 loại môi trường, khi so sánh các chỉ tiêu hệ số nhân chồi, chiều dài chồi và số lá/chồi môi trường B5 đều kém hơn rõ rệt. Do đó, khơng nên sử dụng môi trường B5 để nuôi cấy mơ Tếch vì chồi ni cấy cho hệ số nhân thấp, chồi ngắn còi cọc và nhiều lá giả.
Trong hai loại mơi trường cịn lại thì mơi trường WPM có hệ số nhân (2,10 lần) cao hơn so với môi trường MS (1,73 lần), song chiều dài chồi và số lá của môi trường MS lại cao hơn. Hơn nữa, thực tế quan sát thì trong mơi trường MS các chồi bật khoẻ và mập hơn so với cấy trong môi trường WPM.
Từ kết quả quan sát và so sánh như trên đề tài kết luận môi trường MS cho hệ số nhân chồi cao và chất lượng chồi tốt (chồi khoẻ đẹp, lá xanh tốt). Môi trường WPM tuy cho hệ số nhân chồi cao hơn nhưng chồi gầy yếu, có biểu hiện mọng nước, lá và thân có màu xanh nhạt. Kết quả thu được ở trên chúng tơi có thể giải thích rằng sự thay đổi hàm lượng khoáng chủ yếu là các chất đa lượng và vi lượng như Nitơ, Phốtpho, Kali, Mangan, Magie…đã ảnh hưởng đến quá trình hình thành và phát triển của chồi Tếch in vitro. Môi
trường MS và WPM có thành phần chất đa lượng, Vitamin và chất hữu cơ giống nhau song liều lượng lại khác nhau. Lượng đạm (N) trong môi trường WPM chỉ bằng 1/4 so với môi trường MS. Trong ba loại mơi trường thử nghiệm thì mơi trường MS có đầy đủ các chất dinh dưỡng có thể cung cấp cho mẫu cấy ban đầu giống như ở cây mẹ nên chúng có khả năng bật chồi và phát triển tốt. Môi trường WPM có hệ số nhân chồi cao nhưng chất lượng chồi kém, có thể tiến hành nghiên cứu cải tiến hàm lượng dinh dưỡng khoáng và vitamin để nâng cao chất lượng chồi.
Như vậy, mơi trường MS là mơi trường thích hợp để ni cấy in vitro
đối với loài Tếch và đề tài tiếp tục sử dụng mơi trường này cho các thí nghiệm tiếp theo.
ảnh 2: Chồi Tếch nuôi cấy sau 4 tuần trong 3 loại môi trường khác nhau