3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.3.5. Phương pháp đo phổ sắc ký lọc gel (GPC)
Phổ GPC dùng để xác định KLPT của polyme, mẫu oligochitosan được đo trên máy LC – 20AB Shimadzu, Nhật Bản sử dụng detector RID –10A và cột Ultrahydrogel 250 của hãng Waters, kích thước cột 7,8 x 300 mm tại Trung tâm Nghiên cứu và Triển khai Công nghệ Bức xạ TP.HCM. Nhiệt độ làm việc của máy 40°C, pha động sử dụng dung môi CH3COOH 0,25M/CH3COONa 0,25M với tốc độ chảy là 1 mL/phút.
Lập đường chuẩn thời gian lưu phụ thuộc vào khối lượng phân tử của mẫu chuẩn Pullulan: Hòa tan 0,03 g các mẫu chuẩn Pullulan có khối lượng phân tử là 380.000, 100.000, 48.000, 23.700, 12.200 và 738 g.mol-1 vào trong 1 mL dung môi CH3COOH 0,25M /CH3COONa 0,25M. Thể tích mẫu tiêm vào cột 50 μl. Xác định thời gian lưu của các mẫu dung dịch pullulan từ phổ đồ GPC (Bảng 2.1). Thiết lập đường chuẩn trên máy tính và mối tương quan giữa khối lượng phân tử và thời gian lưu (Hình 2.8).
Bảng 2.1. Khối lượng phân tử và thời gian lưu của các mẫu chuẩn Pullulan
Số TT mẫu 1 2 3 4 5 6
Thời gian lưu (Phút) 6,060 6,601 7,117 7,690 8,177 9,946 KLPT 103 (g.mol-1) 380 100 48 23,7 12,2 0,738
Hình 2.8. Đường chuẩn tương quan giữa khối lượng phân tử và thời gian lưu của Pullulans chuẩn.
Tiến hành đo mẫu: Cân 0,05 g chitosan hòa tan trong 10 mL dung dịch đệm CH3COOH 0,25M/CH3COONa 0,25M. Dung dịch chitosan 0,5% được sử dụng bơm lọc qua giấy lọc sợi thủy tinh. Sau đó tiêm mẫu với thể tích 50 μl vào cột sắc ký. Các điều kiện khác tương tự như đã mô tả đối với mẫu chuẩn pullulan. Xác định thời gian lưu và đối chiếu với đường chuẩn để có khối lượng phân tử của mẫu chitosan cần đo.