- Lên men và thu hồi nisin: Sử dụng hệ thống bình lên men 5, 10 l, 100 l và các thiết bị
2.2.4. Xác định hoạt tính kháng khuẩn của màng
Hoạt tính kháng khuẩn của màng được xác định theo 2 cách:
Phương pháp khuếch tán trên thạch bán lỏng: Chủng kiểm định L. plantarum JCM 1149 được nuôi tĩnh qua đêm (12 giờ) trong môi trường MRS lỏng ở 30 °C (OD600 = 1,28). Môi trường MRS bán lỏng (có chứa 0,6 % thạch) được khử trùng ở 121 °C, 15 phút. Sau khi làm lạnh đến nhiệt độ khoảng 37 † 40 °C, bổ sung 0,5 % (v/v) dịch
huyền phù vi khuẩn chủng kiểm định, lắc đều và đổ ra đĩa petri. Đợi thạch nguội, đặt các miếng màng PLA – nisin lên bề mặt thạch, tiếp theo giữ ở nhiệt độ 4 oC trong khoảng 4 giờ, sau đó ủ ở 37 oC qua đêm. Quan sát và đo đường kính vịng vơ khuẩn được hình thành.
Phương pháp xác định số lượng chủng kiểm định bị tiêu diệt trong môi trường dịch thể: Cắt màng PLA - nisin ra làm các miếng khác nhau, mỗi miếng màng có diện tích bằng 2 cm2. Các miếng màng được cho vào các ống nghiệm có chứa 2 ml môi trường MRS dịch thể. Bổ sung 0.5 % dịch huyền phù chủng vi khuẩn kiểm định vào các ống, mẫu đối chứng cũng bổ sung 0,5 % chủng kiểm định nhưng không cho màng PLA – nisin. Các mẫu nuôi ở 37 o
C, lấy mẫu trải đĩa kiểm tra số lượng tế bào vi khuẩn theo các mốc thời gian: 0; 4; 8; 12; 16; 20; 24; 36; 48 giờ.
Ảnh hưởng của tỷ lệ methylene chloride lên hoạt tính nisin của màng PLA - nisin:
Tỷ lệ methylene chloride được sử dụng trong nghiên cứu này là 10, 15, 20, 25 và 30 ml. Sau khi màng PLA - nisin được tạo ra theo các tỉ lệ dung môi methylene chloride ở trên, xác định hoạt tính kháng khuẩn của màng.
Ảnh hưởng của tỷ lệ PLA: Màng PLA - nisin được tạo ra như mô tả ở mục 2.2.2.
Nhưng PLA được bổ sung với các lượng khác nhau: 0,5 g; 0,75 g; 0,9 g và 1 g. Sau khi màng PLA - nisin được tạo ra với các tỉ lệ PLA ở trên, xác định hoạt tính kháng khuẩn của màng.
Ảnh hưởng của nhiệt độ trong quá trình tạo màng: Màng PLA - nisin được tạo ra
như mô tả ở mục 2.2.2, nhưng được đặt tại các nhiệt độ khác nhau: 37, 60, 70 và 80 °C. Sau 15 phút, lấy hỗn hợp dung dịch trên đổ ra đĩa petri để tạo màng. Xác định hoạt tính kháng khuẩn của màng.