Trong thí nghiệm này, chúng tôi bổ sung thêm 10 g/L bột hồi tương đương với 0,8 g/L axit shikimic vào môi trường nuôi cấy MD1, MD2, MD3. Lượng rapamycin thu được trong các môi trường này được thể hiện qua hình 3.13.
Hình 3.13. Biểu đồ thể hiện lượng rapamycin thu được trong môi trường bổ sung acid shikimic
Kết quả cho thấy axit shikimic có ảnh hưởng tích cực tới quá trình sinh tổng hợp rapamycin, cụ thể là lượng rapamycin thu được từ các chủng xạ khuẩn nuôi trong môi trường bổ sung axit shikimic cao hơn so với các môi trường không bổ sung. Khi bổ sung axit shikimic vào môi trường gốc MD1, lượng rapamycin thu được từ chủng WT/rapG (148,4 mg/L) tăng hơn hai lần so với nuôi trong môi trường không bổ sung (75,1 mg/L), trong khi đó chủng WT cho lượng rapamycin thu được (82,1 mg/L) tương đương với môi trường gốc (72,9 mg/L) và không có sự chênh lệch lớn. Trong môi trường MD2 bổ sung axit shikimic, lượng rapamycin thu được từ chủng WT là 35,1 mg/L và WT/rapG là 89,1 mg/L cao hơn so với trong môi trường MD2 từ 1-2 lần. Trong môi trường MD3 thêm axit shikimic, lượng rapamycin tăng nhẹ (WT – 7,6 mg/L và WT/rapG – 8,1 mg/L), không cao hơn nhiều so với môi trường MD3. Lượng rapamycin thu được từ chủng xạ khuẩn WT/rapG trong môi trường MD1 cao hơn so với lượng rapamycin thu được trong nghiên cứu của Fang A.và cộng sự (87 g/L) [14]. Fang bổ sung thêm 9,9 g/L acid shikimic vào môi trường nuôi là điều kiện tối ưu nhất để thu được lượng rapamycin lớn nhất từ chủng xạ khuẩn đột biến ngẫu nhiên S. hygroscopicus C9 [14]. Trong kết quả thí nghiệm của chúng tôi, khi bổ sung
0,8 g/L axit shikimic vào môi trường nuôi cấy chủng xạ khuẩn chuyển gen WT/rapG cho lượng rapamycin thu được là 148,4 mg/L, cao hơn hẳn so với thí nghiệm của Fang [14].
Từ các bài báo trước đây, axit shikimic đã được chứng minh là yếu tố tham gia vào quá trình tạo tiền chất rapamycin [42]. Do đó, bổ sung dịch chiết của bột đại hồi chứa axit shikimic vào môi trường giúp tăng cường khả năng tổng hợp rapamycin của hai chủng WT và WT/rapG so với môi trường gốc. Chủng xạ khuẩn WT/rapG là chủng được tăng cường biểu hiện gen điều hòa dương rapG nên quá trình tổng hợp rapamycin của chủng WT/rapG mạnh hơn chủng WT, do đó lượng rapamycin thu được từ chủng WT/rapG cao hơn so với WT.