CHƢƠNG 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP
2.4 Phƣơng pháp nghiên cứu
2.4.1 Tách chiết và tinh sạch α-mangostin
Hoạt chất α-mangostin được tách chiết theo quy trình như hình 2.1.
Hình 2.1. Quy trình tinh sạch α-mangostin từ vỏ quả măng cụt Garcinia
Vỏ quả măng cụt được rửa sạch, sấy khô trong tủ ấm 600C, sau đó được nghiền thành bột mịn. Bột măng cụt được bổ sung ethanol 96% (tỉ lệ nguyên liệu : dung môi là 1:3) ủ ở 600C trong 4 giờ. Dịch chiết được sấy khô chân không đến khối lượng không đổi, thu cặn, xác định hàm lượng cao chiết ethanol thu được. Cao chiết được sử dụng để tinh sạch sơ bộ bằng phương pháp chiết phân đoạn nhằm loại bớt các hợp chất tan trong nước, sau đó được tinh sạch bằng sắc kí cột silica gel. Cuối cùng độ tinh sạch được kiểm tra bằng phương pháp sắc kí bản mỏng [5].
Sau khi thu pha trên và cất cô quay, hoạt chất được hòa tan trở lại n-hexan và được tinh sạch trên sắc kí cột hạt sillica gel với kích thước 70-230 mesh (Merck Kiselgel). Cột được cân bằng một giờ với n-hexan. Sau đó mẫu được đẩy với hệ dung môi chloroform: acetone theo các tỉ lệ lần lượt là 10:1, 5:1 và 0:1. Độ tinh sạch của các phân đoạn được kiểm tra qua sắc kí bản mỏng sử dụng hệ dung môi dichlomethane : methanol với tỉ lệ 96:4. Sau đó các phân đoạn có thể hiện mangostin trên băng sẽ được tinh sạch trên cột silica gel lần hai sử dụng hệ dung môi n-hexan : ethyl acetate với tỉ lệ 6:1 và 12:1. Mẫu thu được lại được chạy sắc kí bản mỏng lần nữa để kiểm tra độ tinh sạch, những phân đoạn được tinh sạch xuất hiện vạch ngang băng so với băng chuẩn α-mangostin được thu lại, cô quay đến kết tinh, cân xác định khối lượng, hòa trở lại dung môi theo nồng độ xác định và được đưa thử hoạt tính [5].