lên men 5 và 10 lít
Cơ sở lý thuyết
Tế bào vi khuẩn E. coli tái tổ hợp mang gene tổng hợp IL-2 đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng LBA ở nhiệt độ và độ sục khí thích hợp cho việc sinh trƣởng. Nhờ cơ chế cảm ứng operon lac bằng hóa chất IPTG, protein IL-2 đƣợc tổng hợp.
Các bƣớc tiến hành
Chuẩn bị 2,8 và 5,6 lít (gọi là V lít) môi trƣờng LB tƣơng ứng trong các hệ thống lên men 5 và 10 lít. Sục khí và khuấy để bão hoà nguồn oxy trong môi trƣờng trƣớc khi lên men. Nuôi cấy 1V/14 lít chủng giống E. coli BL21-IL2 qua đêm tại nhiệt độ 37°C trong môi trƣờng LB có bổ sung Amp 100 μg/ml. Bổ sung toàn bộ dịch nuôi cấy qua đêm vào bình lên men. Điều kiện lên men ban đầu là: nhiệt độ 37°C, pH môi trƣờng khoảng 6,0 - 7,0, độ sục khí là 0,5 lít khí sục vào/lít môi trƣờng/phút (vvm), tốc độ khuấy 200 vòng/phút.
Sau 2 giờ nuôi cấy, tăng tốc độ khuấy lên 400 vòng/phút, sau 3 giờ tăng 600 vòng/phút và tăng sục khí lên 1 vvm. Nuôi cấy chủng đến khi chỉ số dOT (nồng độ oxy hòa tan trong môi trƣờng) giảm xuống dƣới 20% thì bổ sung dinh dƣỡng lần thứ nhất với nồng độ cuối cùng 1% glucose và 0,5% cao nấm men.
Tiếp tục duy trì tốc độ khuấy 600 vòng/phút và độ sục khí 1 vvm để tăng sinh khối tế bào sau lên men. Nuôi cấy đến khi dOT giảm xuống dƣới 20% thì tiến hành bổ sung dinh dƣỡng lần thứ hai với nồng độ cuối cùng 1% glucose và 0,5% cao nấm men. Khi giá trị OD600 khoảng từ 15 đến 20, tăng nhiệt độ lên đạt 47°C bổ sung 0,1 mM IPTG để cảm ứng quá trình sinh tổng hợp protein IL-2.
Tiếp tục kiểm tra mật độ tế bào theo thời gian sau khi cảm ứng. Mẫu đƣợc lấy tại các giờ khác nhau và dừng lên men sau 6 giờ cảm ứng. Sinh khối tế bào sau quá trình lên men đƣợc ly tâm loại bỏ môi trƣờng và tế bào đƣợc hòa lại trong đệm Tris- HCl 20 mM và giữ ở -80°C.