Đoạn DNA mã hóa cho protein KOD từ vector pUC19-KOD được nhân dòng bằng kỹ thuật PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu. Đoạn gen được nhân lên có kích thước 2341 bp, có vị trí cắt của hai enzyme cắt giới hạn BamHI và EcoRI ở hai đầu 5’ và 3’, đảm bảo cho gen sau khi được cắt và chèn vào vector pET-M sẽ giữ đúng
khung đọc. Tương tự đoạn gen được chèn vào vector pGEX-4T-1 cũng có vị trí cắt của hai enzyme BamHI và SalI ở hai đầu 5’ và 3’.
Phản ứng PCR được thực hiện với thành phần phản ứng và chu trình nhiệt giống như đã mô tả ở phần phương pháp. Sản phẩm PCR được điện di trê n gel agarose 1% và quan sát kết quả dưới máy soi gel. Kết quả điện di sản phẩm PCR được thể hiện trên Hình 12, trong đó, marker M là thang DNA chuẩn giúp xác định kích thước tương đối của các băng DNA trong mẫu cần phân tích. Trong các đường chạy mẫu phân tích KOD-pGEX và KOD-pETM đều xuất hiện một băng duy nhất có kích thước khoảng trên 2300 bp tương đương với kích thước lý thuyết của gen Kod. Điều này chỉ ra rằng, chúng tôi đã nhân thành công đoạn gen mã hóa cho KOD DNA polymerase bằng kỹ thuật PCR sử dụng cặp mồi đặc hiệu KOD BamHI F và KOD EcoRI R, Kod BamHI F và KOD SalI R. Độ sáng của băng sản phẩm
được so sánh với thang chuẩn cho thấy nồng độ sản phẩm PCR cao, có thể sử dụng cho phản ứng cắt nối.
A B
Hình 13: Kết quả điện di sản phẩm PCR gen KOD từ vector pUC19-KOD
(A) Đường chạy KOD pETM: sản phẩm PCR nhân gen KOD chứa trình tự cắt BamHI và
EcoRI ở hai đầu 5’ và 3’, so sánh với thang chuẩn 1 kb của hãng intRon ở đường chạy M.
(B) Đường chạy KOD pGEX: sản phẩm PCR nhân gen KOD chứa trình tự cắt BamHI và
SalI ở hai đầu 5’ và 3’, so sánh với thang chuẩn DNA 1 kb ở đường chạy M..