PHẦN 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5.2. Phương pháp gây nhiễm virus PRRS trên tế bào
Phương pháp gây nhiễm virus trên tế bào là phương pháp khoa học tiên tiến được sử dụng rộng rãi trong Y học để nghiên cứu các virus như: phân lập, nuôi cấy, giám định, chuẩn độ, quan sát hình thái siêu cấu trúc của virus và đặc biệt dùng các môi trường tế bào tổ chức để nuôi cấy các vắc-xin virus. Với nhiều loại virus sự nhân lên của chúng tiến triển song song với sự thoái hoá của các tế bào nuôi, một số virus gây bệnh cho tế bào rất đặc trưng. Những biến đổi có tính chất đặc trưng đó gọi là sự huỷ hoại của tế bào chủ (Cytophathogenic Effect - CPE) hoặc các ổ tế bào bị hoại tử. Mỗi ổ tế bào bị hoại tử đó được gọi là một đơn vị plague, có thể đánh giá được khối lượng virus gây nhiễm bằng số đơn vị plague xuất hiện. Có những tế bào bị nhiễm virus chưa đến mức bị chết nhưng chức năng của tế bào này đã bị thay đổi.
Căn cứ vào CPE khi phân lập virus quan sát được dưới kính hiển vi soi ngược có thể đánh giá được hiệu quả phân lập, nuôi cấy virus.
Phương pháp gây nhiễm virus cho tế bào Marc 145 (chai T25). Vật liệu gây nhiễm cho mỗi chai tế bào T25 là 200µl huyễn dịch virus PRRS. Mỗi chủng virus nghiên cứu được gây nhiễm lên tế bào Marc 145 ở MOI=0,1 hàng ngày theo dõi bệnh tích tế bào và ghi chép kết quả, tiến hành theo dõi cho đến khi virus phá hủy hoàn toàn tế bào. Những giếng tế bào có bệnh tích được thu và bảo quản ở -80oC để sử dụng cho các nghiên cứu tiếp theo.