PRRS-08 QUA CÁC ĐỜI CẤY CHUYỂN
PRRS-08 QUA CÁC ĐỜI CẤY CHUYỂN
Theo mục đích của đề tài, chủng virus đại diện KTY-PRRS-08 được lựa chọn dùng để nghiên cứu chế tạo chủng virus PRRS nhược độc. Tiến hành cấy truyền liên tiếp 90 đời chủng này trên môi trường tế bào MARC-145. Do điều kiện thời gian thực tập hạn chế, số lượng các đời tương đối nhiều nên chúng tôi sẽ lựa chọn đại diện các đời cấy chuyển: Đời 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ( ký hiệu các đời P#1, P#20, P#30, P#40, P#50, P#60, P#70, P#80, P#90) Cụ thể chúng tôi chuẩn bị một khay 96 giếng tế bào MARC-145 đã mọc đều một lớp trên bề mặt nuôi cấy. Số lượng tế bào trong một giếng của khay được xác định bằng cách đếm 4 giếng đại diện ở 4 góc của khay 96 và tính trung bình. Sau đó, huyễn dịch chứa virus được đưa vào gây nhiễm cho các giếng tế bào theo lượng thích hợp. Khay tế bào gây nhiễm virus được ủ ở 37°C/5% CO2 để theo dõi CPE qua các thời điểm 12 giờ, 24 giờ, 36 giờ, 48 giờ, 60 giờ… sau khi gây nhiễm cho đến khi CPE không còn phát triển thêm trên các giếng tế bào nữa.
Ở mỗi đời tiếp truyền chúng tôi đều ghi chép thời gian xuất hiên bệnh tích và thời gian bệnh tích đạt 100%. Sau đó ở các đời 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 chúng tôi lại giám định lại virus bằng RT-PCR. Kết quả tiếp truyền đời virus cường độc KTY-PRRS-08 từ môi trường tế bào MARC-145 được trình bày ở bảng 4.1 và bảng 4.2.
Kết quả tiếp truyền cho thấy ở P#1, P#10, P#20 bệnh tích tế bào quan sát được xuất hiện sớm sau 12 giờ gây nhiễm, sau đó số lượng tế bào bị phá huỷ tăng dần sau 36 giờ gây nhiễm, đạt 45%, đạt 65% sau 48 giờ gây nhiễm và toàn bộ tế bào bị phá huỷ với bệnh tích đặc trưng sau 60 giờ gây nhiễm. Nhưng ở đời cấy chuyển P#30, P#40, P#50, P#60, P#70, P#80, P#90 thời gian xuất hiện bệnh tích tế bào được nhận thấy sớm hơn so với đời cấy chuyển P#20, sau 24 giờ gây nhiễm thì số lượng tế bào bị virus phá huỷ quan sát đạt 55%, sau đó đạt 85%- 90% sau 36 giờ gây nhiễm. Sau đó toàn bộ tế bào bong tróc khỏi đáy bình tế bào nuôi cấy ở thời điểm 60-72 giờ sau khi gây nhiễm.