ĐOẠN CÀNH GIÂM CHUẨN BỊ CHỒI GHÉP
Cũng giống nhƣ khi ghép in vivo, mắt ghép hay cành ghép phải đảm bảo
đƣợc lấy từ cây sạch bệnh, khỏe mạnh để nâng cao khả năng sống của mắt ghép, cành ghép giúp cho cây phát triển tốt thì trong vi ghép chồi ghép cũng cần đảm bảo để tạo giống sạch bệnh. Một trong những yếu tố quan trọng trong tạo giống sạch bệnh invitro là mẫu cấy cần phải đƣợc vô trùng, vì trong điều kiện nuôi cấy giàu dinh dƣỡng nấm và vi khuẩn phát triển rất nhanh chóng và sẽ làm hỏng mẫu cấy. Sau 3 ngày cấy có thể quan sát đƣợc tỷ lệ mẫu nhiễm. Cây ăn quả có múi thƣờng bị rất nhiều loại sâu bệnh tấn công vì vậy khi mẫu đƣợc đƣa từ trong vƣờn vào sẽ tồn trữ rất nhiều loại bào tử nấm, vi khuẩn.
Trƣớc khi đƣợc đƣa vào buồng cấy khử trùng mẫu cành đƣợc rửa sạch bằng xà phòng và ngâm trong dung dịch diệt nấm cabenzin 0,2% trong 10 phút, diệt hầu hết các loại bào thể cũng nhƣ bào tử nấm. Sau đó mẫu cành đƣợc rửa sạch một lần nữa bằng xà phòng và đƣa vào buồng cấy khử trùng qua cồn 700 trong 1 phút, rửa sạch nƣớc cất vô trùng 3 lần. Sau đó tiến hành khử trùng với các dung dịch khử trùng khác trong 15 phút, mỗi công thức tiến hành trên 5 đoạn cành. Thao tác trong buồng cấy từ khử trùng, cấy mẫu cần tuân thủ các nguyên tắc vô trùng để đảm bảo thu đƣợc lƣợng mẫu sạch cao nhất.
Bảng 4.5. Ảnh hƣởng của các dung dịch khử trùng đến tỉ ệ vô trùng của đoạn cành giâ giống ca Vân Du
Công thức Tỷ ệ nhiễ (%) Tỷ ệ bật ầ sau 3 tuần (%)
Chiều dài chồi ầ sau 3 tuần (cm) Chất ƣợng chồi CT1- Javen 5% 46,7 37,5 0,4 + CT2- Presep 5% 100 0 0 - CT3- HgCl2 0,1% 41,1 43,6 0,3 +
Chú thích: (+ ) chồi xanh nhạt, kích thƣớc phù hợp với vi ghép.
Mẫu cành cam Vân Du đƣợc xử lí ở các công thức khử trùng khác nhau cho các kết quả khác nhau. Từ bảng số liệu cho ta thấy Presept 5% không có hiệu quả trong khử trùng mẫu cành cam Vân Du,100% mẫu đƣợc xử lí điều nhiễm
mặc dù đã xử lí thuốc diệt nấm từ trƣớc. Dung dịch HgCl2 0.1% và dung dịch
mẫu đƣợc khử trùng bằng dung dịch HgCl2 đạt 43,6% cao hơn so với mẫu cành đƣợc xử lí bằng dung dịch Javen,chỉ đạt 37,5%. Sau 3 tuần theo dõi, chiều dài chồi mầm và màu sắc chồi hầu nhƣ không có sự khác biệt rõ rệt giữa Javen và HgCl2. Công thức khử trùng tối ƣu với đoạn cành cam Vân Du là HgCl2 0,1% trong vòng 15 phút
Bảng 4.6. Ảnh hƣởng của các dung dịch khử trùng đến tỷ ệ vô trùng của đoạn cành giâm giống cam Sunkit
Công thức Tỷ ệ nhiễ (%) Tỷ ệ bật ầ sau 3 tuần (%) Chiều dài ầ sau 3 tuần (c ) Chất ƣợng chồi CT1- Javen 5% 26,7 17,8 0,1 - CT2- Presep 5% 76,9 19,1 0,2 - CT3- HgCl2 0,1% 40 33,3 0,6 +
Chú thích: (+ ) chồi xanh nhạt, kích thƣớc phù hợp với vi ghép
Mẫu cành cam Sunkit đƣợc xử lí ở các công thức khử trùng khác nhau cho các kết quả khác nhau. Từ bảng số liệu cho ta thấy Presept 5% không có hiệu quả rõ ràng trong khử trùng mẫu cành cam, tỷ lệ mẫu đƣợc xử lí nhiễm bệnh cao nhất,
lên tới 76,9% mặc dù đã xử lí thuốc diệt nấm từ trƣớc. Dung dịch HgCl2 0.1% và
dung dịch Javen cho tỉ lệ mẫu nhiễm đa phần đều dƣới 50% tuy nhiên tỷ lệ nảy
chồi của mẫu đƣợc khử trùng bằng dung dịch HgCl2 đạt tới 33,3% cao hơn khá
nhiều so với mẫu cành đƣợc xử lí bằng dung dịch Javen, chỉ đạt 17,8%. Về chiều
dài chồi mầm sau 3 tuần, mầm bật từ HgCl2 cho kích thƣớc và chất lƣợng mầm
tốt nhất, chổi có màu xanh nhạt, phát triển khỏe, kích thƣớc phù hợp cho vi ghép, sau đó là mầm từ Presept và mầm kém nhất là từ Javen. Công thức khử trùng tối
ƣu với đoạn cành cam Sunkit là HgCl2 0,1% trong vòng 15 phút.
Bảng 4.7. Ảnh hƣởng của các dung dịch khử trùng đến tỉ ệ vô trùng của đoạn cành giâ giống ca V2
Công thức Tỷ ệ
nhiễ (%) sau 3 tuần (%) Tỷ ệ bật ầ
Chiều dài chồi ầ sau 3 tuần bật ầ (c ) Chất ƣợng chồi CT1- Javen 5% 70 55 0,7 + CT2- Presep 5% 100 0 0 - CT3- HgCl2 0,1% 66,7 45 0,6 +
Mẫu cành cam V2 đƣợc xử lí ở các công thức khử trùng khác nhau cho các kết quả khác nhau. Từ bảng số liệu cho ta thấy, tƣơng tự giống cam Vân Du, cam V2 khi khử trùng bằng Presept 5% cũng không có hiệu quả trong khử trùng mẫu cành cam, tỷ lệ mẫu đƣợc xử lí nhiễm bệnh lên tới 100% mặc dù đã xử lí
thuốc diệt nấm từ trƣớc. Dung dịch HgCl2 0,1% và dung dịch Javen cho tỉ lệ mẫu
nhiễm đa phần đều khá cao, trên 50% tuy nhiên tỷ lệ nảy chồi của mẫu đƣợc khử trùng bằng dung dịch Javen cao hơn so với mẫu cành đƣợc xử lí bằng dung dịch
HgCl2. Ngoài ra, mầm bật từ khử trùng HgCl2 cho kích thƣớc và chất lƣợng mầm
không khác biệt quá rõ rệt so với mầm bật từ khử trùng Javen. Nhƣ vậy, đối với đoàn cành cam V2 thì công thức khử trùng dùng Javen 5% trong vòng 15 phút cho hiệu quả tốt nhất. Giữa 3 giống cam thí nghiệm cho thấy cùng sử dụng các dung dịch khử trùng nhƣng cho thấy kết quả về tỷ lệ nhiễm bệnh, cũng nhƣ chiều dài mầm và chất lƣợng mầm có sự khác biệt nhất định. Presept cho thấy hiệu quả kém nhất trong việc khử trùng trên cả 3 đối tƣợng cành giâm. HgCl2 0,1% cho hiệu quả khử trùng tốt nhất đối với việc khử trùng giống cam Vân Du và Sunkit, trong khi Javen 5% lại tỏ ra hiệu quả với giống cam V2.
Hình 4.7. Mẫu sạch (bên trái) và ẫu nhiễ bệnh (bên phải) sau khử trùng đoạn cành giâ