Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.1. Kết quả đáp ứng miễn dịch của chuột với các kháng nguyên
dịch tối ưu nhằm thu được tế bào sinh kháng thể tốt. Tế bào Lympho B mẫn cảm kháng nguyên thu từ lách và hạch bẹn của chuột được dung hợp với tế bào Myeloma Sp2/0 để tạo dịng tế bào lai có khả năng tiết kháng thể đơn dòng. Bằng phản ứng ELISA đã sàng lọc được dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với Progesterone. Kết quả thu được từ nghiên cứu này cho thấy kháng nguyên Progesterone có khả năng gây đáp ứng miễn dịch ở chuột BALB/c tạo kháng thể đơn dòng kháng lại kháng nguyên Progesterone. Từ phản ứng ELISA cho thấy các dòng tế bào lai tiết kháng thể đơn dòng đặc hiệu với kháng nguyên Progesterone.
4.1. KẾT QUẢ ĐÁP ỨNG MIỄN DỊCH CỦA CHUỘT VỚI CÁC KHÁNG NGUYÊN NGUYÊN
Sau thời gian gây miễn dịch cho chuột theo quy trình, chúng tơi tiến hành lấy mẫu máu của từng chuột thí nghiệm, tách huyết thanh của chuột trong mỗi lơ thí nghiệm, sử dụng phương pháp ELISA để so sánh khả năng đáp ứng miễn dịch của các cá thể, tức là khả năng sinh kháng thể kháng progesterone. Phản ứng ELISA được sử dụng để phát hiện sự có mặt của kháng thể trong huyết thanh.
Bảng 4.1. Giá trị OD450 mẫu huyết thanh chuột ở các nồng độ gây miễn dịch khác nhau đối với từng loại kháng nguyên
Loại kháng nguyên
Nồng độ kháng nguyên gây miễn dịch (µg/lần/con)
0 50 100 200 300 Progesterone Antigen 0,081a±0,012 0,597ab±0,146 1,172b± 0,247 2,301b±0,698 2,089b± 0,723 Progesterone- 3- BSA Antigen 0,064a±0,006 0,514ab±0,191 0,952b± 0,317 1,916b±0,781 1,736b± 0,829 Progesterone- 3- CMO:BSA Antigen 0,067a±0,005 0,526ab±0,261 1,075b± 0,519 1,865b± 0,68 1,811b± 0,583
Ghi chú: Trong cùng một hàng, các giá trị trung bình mang các chữ cái khác nhau là sai khác có ý nghĩa thống kê, p<0,0001
Từ kết quả Bảng 4.1 cho thấy:
- Với lô đối chứng không sử dụng kháng nguyên gây miễn dịch là 0µg/lần/con thì giá trị OD của mẫu huyết thanh được kiểm tra với từng loại kháng nguyên: Progesterone Antigen là 0,081±0,012; Progesterone-3-BSA Antigen là 0,064± 0,006; Progesterone-3-CMO:BSA Antigen là 0,067± 0,005.
- Với nồng độ kháng ngun gây miễn dịch là 50µg/lần/con thì giá trị OD của mẫu huyết thanh được kiểm tra với từng loại kháng nguyên: Progesterone Antigen là 0,597± 0,146; Progesterone-3-BSA Antigen là 0,514± 0,191; Progesterone -3- CMO:BSA Antigen là 0,526± 0,261.
- Với nồng độ kháng ngun gây miễn dịch là 100µg/lần/con thì giá trị OD của mẫu huyết thanh được kiểm tra với từng loại kháng nguyên: Progesterone Antigen là 1,172 ± 0,247; Progesterone-3-BSA Antigen là 0,952 ± 0,317; Progesterone-3-CMO:BSA Antigen là 1,075 ± 0,519
- Với nồng độ kháng nguyên gây miễn dịch là 200µg/lần/con thì giá trị OD của mẫu huyết thanh được kiểm tra với từng loại kháng nguyên: Progesterone Antigen là 2,301± 0,698; Progesterone-3-BSA Antigen là 1,916± 0,781; Progesterone -3- CMO:BSA Antigen là 1,865± 0,68.
- Với nồng độ kháng ngun gây miễn dịch là 300µg/lần/con thì giá trị OD của mẫu huyết thanh được kiểm tra với từng loại kháng nguyên: Progesterone Antigen là 2,089± 0,723; Progesterone-3-BSA Antigen là 1,736± 0,829; Progesterone-3-CMO:BSA Antigen là 1,811± 0,583.
Giá trị OD phản ánh hàm lượng kháng thể trong huyết thanh của chuột. Giá trị OD càng nhỏ chứng tỏ hàm lượng kháng thể trong huyết thanh càng ít và ngược lại giá trị OD càng lớn thì hàm lượng kháng thể trong huyết thanh càng nhiều.
- Kết quả nghiên cứu cho thấy chuột được tiêm với 4 nồng độ kháng nguyên gây miễn dịch khác nhau cùng với lô đối chứng không sử dụng kháng nguyên đều cho phản ứng miễn dịch. Ở cùng một nồng độ tiêm, giá trị OD450 mẫu huyết thanh khơng có sự khác biệt giữa các chuột được tiêm với các loại kháng nguyên khác nhau (p>0,0001). Giá trị hiệu giá kháng thể có xu hướng tăng khi nồng độ kháng nguyên gây miễn dịch tăng. Giá trị OD450 mẫu huyết thanh khơng có sự khác biệt lớn giữa các chuột được tiêm ở các nồng độ khác nhau (p>0,0001). Tuy nhiên, với nồng độ kháng nguyên gây miễn dịch là 200µg/lần/con thì giá trị hiệu giá kháng thể có xu hướng đạt giá trị cao hơn so
với các nồng độ tiêm khác. Vì vậy, chúng tơi chọn liều 200µg/lần/con là thích