Phần 3 Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.3. Vật liệu nghiên cứu
3.3.1. Thiết bị và dụng cụ Thiết bị
- Máy ly tâm lạnh - Máy đọc kết quả ELISA - Máy chuyển màng lai - Tủ âm 20
- Tủ ấm 370C - Bộ điện di SDS-Page
- Bộ nguồn điện - Máy vortex
- Máy đo pH - Máy chụp ảnh
- Máy lắc - Kính hiển vi
Dụng cụ
- Khay kim loại - Dao mổ, kéo
- Các loại đầu típ - Khay trộn
- Multi pipette - Đĩa ELISA 96 giếng
- Micro pipettes - Ống eppendor
- Bút ghi mẫu - Đĩa petri
- Khẩu trang - Cốc thủy tinh có chia vạch
- Găng tay - Nhíp gắp giun
- Lưới thép - Bộ nghiền giun
- Túi Zip - Phiến kính
- Lamen - Rây lọc
- Ống alcon - Cân
3.3.2. Hóa chất
- Coating buffer: 0.2M sodium carbonate-bicarbonate, pH 9.4
- Skim milk, Tween 20
- PBS Buffer 1X, TBS Buffer 1X - Nước cất
- Acid acetic 10%, Methanol - Tris-HCl: pH 8,8; pH 6,8
- 2-Mercaptoethanol, Glycerol, Bromophenol – Blue
- N, N – methylene bis-acrylamide, TEMED ( N, N, N, N – tetramethylenediamine)
- Ammonium Persulfate (APS)
- Sodium dodecyl sulfate (SDS), Coomasive Blue
- Cơ chất cho ELISA: TMB (3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine) - H2O2 3%, H2SO4 2M
- Cơ chất cho Westorn Blot: 4-Chloro-1-naphthol
- Kháng kháng thể chó: HRP Goat Anti-Dog (IgG) secondary antibody - Màng Polyvinylidene florua (PVDF)
- Giấy lọc
- Nước muối bão hòa
3.3.3. Kháng nguyên
Kháng nguyên giun móc được lưu trữ tại Bộ môn Ký sinh trùng Học viện Nông nghiệp Việt Nam, bảo quản trong tủ âm ở nhiệt độ -20ºC. Kháng nguyên được để đông tan ở 40C trước khi sử dụng trong thí nghiệm.
3.3.4. Kháng thể
Huyết thanh được coi là dương tính với giun móc khi tiến hành mổ khám và soi phân phát hiện thấy sự có mặt của bất kỳ giun trưởng thành, ấu trùng hay trứng của giun móc, và ngược lại huyết thanh được coi là âm tính móc khi không phát hiện dấu hiệu của giun móc khi tiến hành mổ khám hay kiểm tra phân. Huyết thanh tách từ máu của chó lấy mẫu tại phòng khám Gaia.