Sử dụng công thức tính giá trị ngưỡng (cut-off) cho giá trị OD của 20 mẫu huyết thanh âm xác định được giá trị ngưỡng của phản ứng ELISA là 0,536.
Tuy nhiên theo thiết kế phản ứng ELISA của John Croese et al. (1996) một mẫu kháng thể được coi là dương tính với A. caninum khi có giá trị OD vượt điểm ngưỡng có giá trị 0,146 OD và ngược lại, những mẫu cho giá trị OD nhỏ hơn 0,146 là các mẫu âm. Không chỉ vậy, vào năm 2017, David A. Elsemore và cộng sự qua thí nghiệm của mình đưa ra giá trị điểm ngưỡng tìm được là 0,100. Đó có thể là do cả hai tác giả đều sử dụng kháng nguyên và kháng thể ở dạng tinh khiết mà trong thí nghiệm này vì điều kiện không cho phép nên chỉ thực hiện ở mức thô, vì vậy OD của hai tác giả nêu trên là thấp hơn so với kết quả của thí nghiệm.
Độ nhạy và độ đặc hiệu
Sau khi thực hiện soi phân tìm trứng cùng với phản ứng ELISA, kết quả được trình bày ở Bảng 4.1.
Bảng 4.1. Kết quả chẩn đoán bằng phương pháp ELISA
Xét nghiệm chuẩn (Xét nghiệm tìm trứng trong phân) Tổng Dương tính Âm tính ELISA Dương tính 17 3 20 Âm tính 4 16 20 Tổng 21 19 40
Dựa vào kết quả thu được tìm ra giá trị của độ nhạy đạt 85% và độ đặc hiệu đạt 80%. Rajul Parikh et al.(2008) chỉ ra rằng độ nhạy và độ đặc hiệu có vai trò lớn trong việc khẳng định độ chính xác của một thí nghiệm. Hiệu lực của một thí nghiệm đều được đo bằng giá trị của độ nhạy và độ đặc hiệu. Với mỗi một bệnh khác nhau đều có những thí nghiệm khác nhau nhằm chẩn đoán căn bệnh và tất cả các bệnh đều có một tiêu chuẩn vàng khác nhau trong việc chẩn đoán chính xác, nhanh chóng và tiện lợi nhất. Các tiêu chuẩn vàng đó không cố định và luôn thay đổi theo tiến bộ của khoa học kĩ thuật. Những phương pháp và các thiết kế thí nghiệm mới có thể làm thay đổi tiêu chuẩn đã có, nhưng đồng thời trước hết chúng phải được so sánh, đánh giá với tiêu chuẩn đã sẵn có.
Với độ nhạy và độ đặc hiệu lần lượt là 85 và 80% cho thấy phản ứng ELISA phát hiện kháng thể đối với giun móc cho độ chính xác khá cao, tuy nhiên qua đây cũng có thể thấy phản ứng có thể cho kết quả âm tính hay dương tính giả do nhược điểm của phản ứng ELISA là có thể phản ứng chéo.
4.3. Ứng dụng phương pháp ELISA
Chúng tôi chẩn đoán giun móc cho 39 trường hợp tại phòng khám và chăm sóc Thú cưng GAIA, sử dụng đồng thời hai phương pháp phù nổi Fülleborn và phương pháp ELISA với nồng độ kháng nguyên 0,005 µg/ml, nồng độ pha loãng kháng thể là 1/800. Kết quả chẩn đoán được trình bày ở Hình 4.8.
p< 0,05