Phần 3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.5. Phương pháp lây nhiễm kèm các chỉ tiêu đánh giá
Phương pháp lây nhiễm tiến hành theo Lester W. Burgess (2008). Thí nghiệm lây bệnh nhân tạo được thực hiện ở 2 phương pháp lây là có sát thương và khơng có sát thương. Thí nghiệm được tiến hành như sau:
Chuẩn bị nguồn bệnh: Nguồn bệnh là bào tử phân sinh được lấy từ quả cành trên vết bệnh trên quả. Quả cành trên vết bệnh được lấy cho vào ống effpendorf chứa nước cất để giải phóng bào tử phân sinh. Nồng độ bào tử phân sinh được điều chỉnh đạt nồng độ 105 bào tử/ml.
3.4.5.1.Thí nghiệm lây nhiễm trên quả
Chọn 9 quả bưởi có 3 tuổi trong đó có 3 quả non, 3 quả trưởng thành và 3 quả chín, kích thước tương đối đồng đều và quan trọng là khơng có xuất hiện những đốm bệnh trên vỏ quả. Các quả bưởi được rửa sạch bụi đất với nước sau đó thanh trùng bề mặt bằng cách ngâm trong cồn 700 khoảng 2 phút.
Tiến hành lây bệnh nhân tạo:
- Lây nhiễm trong phịng thí nghiệm: Lây nhiễm được tiến hành trên 3 dạng tuổi của quả bưởi ( quả non, quả trưởng thành và quả chín) với 3 lần nhắc lại. Trên mỗi một quả bưởi tiến hành lây theo 2 kiểu: Kiểu 1 dùng pipet nhỏ trực tiếp 20 µl dung dịch bào tử nấm lên bề mặt quả ( không tạo vết thương), kiểu 2 dùng que kim tạo 5 vết thương trên bề mặt quả sau đó nhỏ 20 µl dung dịch bào tử nấm lên bề mặt quả đã tạo vết thương. Sau đó đặt những quả bưởi bên trong hộp
ẩm. Để quả ở nhiệt độ khoảng 25 – 28 0C và ủ tối trong ba ngày đầu. Theo dõi sự biểu hiện triệu chứng trong vịng 1 tháng.
- Lây nhiễm ngồi đồng ruộng: Trên một cây bưởi chọn 9 quả với 3 dạng tuổi, mỗi dạng tuổi 3 quả ( quả non, quả trưởng thành, quả chín), rửa sạch sau đó thanh trùng bằng cồn 700 trong khoảng 2 phút. Trên mỗi quả bưởi tiến hành lây nhiễm theo 2 kiểu: Kiểu 1 sử dụng miếng bơng cán mỏng có kích thước 2 x 2 cm thấm dung dịch bào tử nấm và dán lên bề mặt quả bưởi bằng băng dính trắng, kiểu 2 dùng que kim tạo 5 vết thương sau đó dùng miếng bơng cán mỏng kích thước 2 x 2 cm có thấm dung dịch bào tử nấm và dán lên bề mặt quả bưởi bằng băng dính trắng. Sau khi lây nhiễm xong dùng nilon bọc lại giữ ẩm độ trong quả trong 3 ngày đầu. Theo dõi sự biểu hiện triệu chứng trong vòng 1 tháng.
3.4.5.2.Lây nhiễm trên lá
Phương pháp lây nhiễm trên lá cũng được tiến hành giống như lây nhiễm trên quả. Thí nghiệm cũng được thực hiện trên 3 loại lá (lá non, lá bánh tẻ và lá già).