Phần 3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.4.7.Phương pháp nghiên cứu các chỉ tiêu sinh học
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.7.Phương pháp nghiên cứu các chỉ tiêu sinh học
3.4.7.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của bề mặt giá thể tới nảy mầm và hình thành
đĩa áp của nấm
Thí nghiệm được tiến hành theo Shaw et al., 2006; Shaw et al., 1998: Chuẩn bị vật liệu: Bào tử phân sinh được thu thập từ các vết bệnh trên quả, sau đó rửa 2 lần bằng nước cất vô trùng. Bề mặt giá thể gồm có bề mặt ghét nước là nhựa Polystyren (bản ELISA) và bề mặt ưa nước là thủy tinh (lam kính).
Tiến hành nhỏ 5 µl dịch bào tử chuẩn bị trong nước cất (~106 bào tử/ml) trên bề mặt vật liệu thí nghiệm. Tiếp theo đem vật liệu thí nghiệm để trong hộp ẩm độ bão hòa để ở nhiệt độ 30 0C, trong tối. Quan sát 100 bào tử/ công thức vật liệu sau 24 giờ.
3.4.7.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến nảy mầm và hình thành đĩa áp của nấm
Thí nghiệm được tiến hành theo Korf, 1998; Shaw et al., 2006; Shaw et al., 1998:
Chuẩn bị vật liệu: Bào tử phân sinh được thu thập từ các vết bệnh trên quả, sau đó rửa 2 lần bằng nước cất vô trùng. Tiến hành nhỏ 5 µl dịch bào tử chuẩn bị trong nước cất (~105-6 bào tử/ml) trên bề mặt 3 bản ELISA. Các bản ELISA được để trong hộp ẩm bão hòa ở các nhiệt độ 25 0C, 30 0C, 35 0C và trong bóng tối. Quan sát 100 bào tử/ công thức nhiệt độ sau 24 giờ.
3.4.7.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của cơ chất tới nảy nầm và hình thành đĩa áp của nấm
Thí nghiệm được thực hiện theo Shaw et al., 2000: - Chuẩn bị vật liệu:
+ Bào tử phân sinh được thu thập từ các vết bệnh trên quả, sau đó rửa 2 lần bằng nước cất vô trùng.
+ Cơ chất bao gồm: Ca2+ ( CaCl2 12mM); NPGM (Glucose 0.006% + NH4NO3 0,04 mM + K2HPO4 0.01 mM + MgSO4.7 H20 0.004 mM); Dịch triết cam Vinh ( Pha 2% trong nước cất, pH = 4); Dịch triết chanh ( Pha 2% trong nước cất, pH = 4); Dịch triết bưởi Diễn (Pha 2% trong nước cất, pH = 4); Đối chứng ( nước cất).
Tiến hành: Nhỏ 15 µL dịch cơ chất trộn với 5 mL dịch bào tử được chuẩn bị trong nước cất được nhỏ trên bề mặt ghét nước (bản ELISA). Bản thí nghiệm được đặt trong hộp ẩm bão hòa và ủ ở 30 0C, trong tối. Quan sát 100 bào tử/ công thức vật liệu sau 24 giờ.