Kiểm tra
Đặc điểm Catalase Oxidase Indol
Hiện tượng
Không có hiện tượng sủi bọt
Xuất hiện màu tím đen hay giấy đổi màu (màu xanh)
Không xuất hiện vòng tròn đỏ
Kết quả _ + _
Từ bảng 4.3 cho thấy với những khuẩn lạc của vi khuẩn ORT trên môi trường CBA cho kết quả phản ứng Catalase âm tính (ORT không có men catalase nên chúng không có khả năng phân hủy H2O2 tạo thành H2O và O2 vì vậy phản ứng không tạo bọt). Phản ứng Oxidase dương tính (xuất hiện màu tím đen hay giấy đổi thành màu xanh). Tiếp tục lựa chọn những khuẩn lạc điển hình trên, tăng sinh trên môi trường BHB, ủ 370C trong thời gian 24 giờ, CO2 5%, sau đó lấy canh khuẩn thử trên phản ứng Indol, phản ứng này cho kết quả âm tính (không xuất hiện vòng tròn đỏ). Kết quả nghiên cứu này cho thấy 100% số mẫu tiến hành giám định đặc tính sinh hóa cho các kết quả trùng khớp với các kết quả nghiên cứu trước đó của B. R. Charlton và cs., 1993, H.M Hafez và cs., 1996 với Catalase (-), Oxidase (+), Indol (-). Trong quá trình tiến hành các thí nghiệm một số hình ảnh tương ứng với các kết quả nhận được ở hình 4.4:
Indol (-) Catalase (-)
Indol (-) Oxidase (+)
Hình 4.4: Kết quả một số đặc tính sinh hóa ORT 4.3. GIÁM ĐỊNH VI KHUẨN BẰNG PCR 4.3. GIÁM ĐỊNH VI KHUẨN BẰNG PCR
Bệnh ORT có nhiều triệu chứng lâm sàng gần giống với các bệnh khác như: Viêm thanh khí quản, viêm đường hô hấp mãn tính, Newcastle, ILT. Mặt khác hiện nay dịch bệnh xảy ra tại các cơ sở chăn nuôi không đơn thuần chỉ do một nguyên nhân gây ra mà thường là các bệnh ghép do nhiều nguyên nhân gây nên. Nếu chỉ dựa vào triệu chứng lâm sàng và bệnh tích giữa các bệnh này gần giống nhau không thể phân biệt được bệnh ORT với các bệnh khác. Do vậy để xác định chính xác sự hiện diện của ORT trong đàn gà cần tiến hành phản ứng
PCR. Từ các kết quả trên, chúng tôi đã lựa chọn ra các mẫu cho kết quả phân lập dương tính, tiến hành chiết tách DNA của vi khuẩn ORT và tiến hành thực hiện phản ứng PCR để kiểm tra có hay không DNA của vi khuẩn ORT trong canh khuẩn. Kết quả phản ứng PCR được thể hiện thông qua hình 4.5
Hình 4.5: Kiểm tra sản phẩm PCR của ORT
M. 100bp DNA ladder; 7. Đối chứng dương (ONL);8. Đối chứng âm; 1, 2, 3, 4, 5, 6 là mẫu cần giám định
Kết quả hình 4.5 cho thấy: đối chứng dương lên vạch, cho sản phẩm PCR như trong thiết kế (sản phẩm PCR thiết kế 784bp). Đối chứng âm không lên vạch tương đương đối chưng dương; chứng tỏ phản ứng hợp cách, cho độ tin cậy cao trong quá trình phân tích và đánh giá kết quả. Các mẫu cần kiểm tra cho sản phẩm PCR nhỏ hơn 800bp (khoảng 784bp). Như vậy, trong canh khuẩn có chứa DNA của vi khuẩn ORT.
4.4. XÁC ĐỊNH CÁC TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG CỦA GÀ MẮC BỆNH ORT BỆNH ORT
Trong quá trình thực hiện đề tài đã tiến hành thu thập mẫu gà mắc ORT từ các trang trại nuôi gà thả vườn, tiến hành quan sát và ghi chép lại các triệu chứng lâm sàng điển hình của gà mắc bệnh ORT. Triệu chứng lâm sàng điển hình của gà mắc bệnh ORT được trình bày ở bảng 4.4: