Phần 3 Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu
3.4.1.Phương pháp xác định khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.1.Phương pháp xác định khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus
cường độc dịch tả vịt VG – 04 trên phôi vịt sau bảo quản
Để kiểm tra về khả năng thích ứng và phát triển ổn định trên phôi vịt, chủng virus cường độc dịch tả vịt VG - 04 đã được cấy truyền nhiều đời trên phôi vịt 13 ngày tuổi.
- Chuẩn bị trứng: trứng vịt 13 ngày tuổi, soi trứng, chọn những phôi khoẻ
mạnh, đánh dấu buồng hơi, đánh dấu vị trí đầu phôi, sát trùng bằng cồn 700 xung
quanh vỏ trứng, sát trùng vị trí buồng hơi bằng cồn Iod 5%. - Chuẩn bị giống virus:
+ Giống virus ở dạng bệnh phẩm khi dùng đem nghiền rồi pha với nước
muối sinh lý 0,9% thành huyễn dịch 10-2; sau đó ly tâm lấy phần nước trong.
+ Giống virus ở dạng nước trứng khi dùng đem pha với nước muối sinh lý
0,9% thành huyễn dịch 10-2.
- Bố trí thí nghiệm: mỗi lần cấy truyền dùng 30 phôi, virus được tiêm vào xoang niệu mô, mỗi phôi được tiêm 0,2 ml. Trong mỗi lần cấy truyền sử dụng 5 phôi làm đối chứng, không tiêm virus.
- Tiến hành: sau khi sát trùng vỏ trứng, dùng dùi đục vô trùng đục 1 lỗ trên đỉnh buồng hơi; sử dụng seringer 1 ml để tiêm. Khi tiêm đưa kim qua lỗ đã
dùi chếch một góc 450 sâu 1,5-2 cm, đầu kim hướng về phía đầu phôi, rồi bơm
0,2 ml giống virus vacxin đã pha. Lấy parafin gắn kín lỗ tiêm lại, để trứng nằm
trên khay trứng và cho vào tủ ấm 370C ấp tiếp. Theo dõi sau khoảng thời gian từ
1- 6 ngày. Nếu thai chết, cho vào tủ lạnh 40C trong 12 giờ để mạch máu co nhỏ
lại tránh xuất huyết, rồi mổ trứng, thu nước trứng và kiểm tra bệnh tích của phôi. Những phôi làm đối chứng không tiêm virus và cũng cho vào tủ ấm ấp. Theo dõi thí nghiệm trong 6 ngày rồi đánh giá kết quả.