Phần 2 Tổng quan tài liệu
2.3.Virus gây bệnh dịch tả vịt
Virus gây bệnh dịch tả vịt là loại DNA virus thuộc họ Herpesviridae
nhóm Herpesvirus. Virus chỉ có một serotyp được biết đến nhưng có nhiều chủng
có độc lực khác nhau tồn tại trong tự nhiên (Nguyễn Như Thanh, 2001). Theo Li
et al. (2006) virus gây bệnh dịch tả vịt có thể được phân loại vào phân họ
Alphaherpesvirinae trong họ Herpesviridae.
2.3.1. Hình thái và kích thước
Nhìn qua kính hiển vi điện tử thấy virus dịch tả vịt có hình cầu, có lớp vỏ bọc bên ngoài và có một lõi ở giữa. Ở những tế bào được gây nhiễm virus, sau 24 giờ thấy các hạt vùi trong nhân và nguyên sinh chất. Đó là những tập hợp không có hình thù, trông giống như bụi. Trong nhân của những tế bào có hay không có thể vùi xuất hiện những khoảng trống, ở đó có những virus hoặc tập hợp virus có capxit hình cầu hoặc sáu cạnh Nucleocapxit có đường kính là 93,5 nm; Sau khi qua màng vào nguyên sinh chất đường kính của hạt virus tăng lên có thể đo được 136 nm và thành thục ở không bào với đường kính 250 nm (Nguyễn Như Thanh, 2001).
Theo Trần Minh Châu (1987) ở Việt Nam, virus dịch tả vịt cường độc chủng 769 có hình thái và cấu trúc giống như virus mà Proctor (1976) đã mô tả.
Virus dịch tả vịt qua được lọc Chamberland, Berkefeld nhưng không qua được màng lọc Seitz. Bằng phương pháp lọc qua màng lọc; Hess and Dardini (1968) đã nhận xét, virus dịch tả vịt nhược độc chủng Jansen và virus cường độc có kích thước 150-250 nm.
2.3.2. Cấu trúc
Virus có vỏ bọc bên ngoài là các nucleocapsid. Capsid hình khối đa diện. Nhân của virus là một ADN sợi đôi, gồm 158 – 180 Kbp. Hệ gen bao gồm 78 khung đọc mở mã hóa protein cho virus. Hệ gen của virus bao gồm các vùng gen unique long (UL) chứa 65 khung đọc mở, unique short (US) chứa 11 khung đọc mở, 2 khung đọc mở còn lại nằm ở vùng cấu trúc lặp unique short internal repeat (IRS) và unique short terminal repeat (TRS).
19 N gu ồn : Y uf en g L i et a l . / V ir ol og y 39 1 (2 00 9) 1 51 –1 61 H ìn h 2. 2. H ệ ge n củ a vi ru s d ic h tả v ịt
2.3.3. Sức đề kháng
Với nhiệt độ, theo nghiên cứu của Hess (1968), ở 22oC virus giảm dần tính
gây nhiễm đến 30 ngày thì virus bị vô hoạt hoàn toàn. Virus bị mất hoạt tính ở
50oC sau 2 giờ 30 phút. Nếu được sấy khô bằng CaCl2 thì sau 9 ngày virus bị
chết. Ở 0o - 4oC virus không bảo quản được 3 tháng nhưng nếu ngâm trong dung
dịch Glyxerin 50% thì virus giữ được độc lực trong thời gian trên. Theo Trần Minh Châu (1986) thì virus dịch tả vịt đề kháng kém với nhiệt độ, ở nhiệt độ cao virus bị vô hoạt nhanh còn ở nhiệt độ thấp hơn thì tính gây nhiễm của virus giảm dần. Ngoài ra, Nguyễn Như Thanh (2001) khẳng định: Virus mất khả năng gây
nhiễm ở 300C sau 2 giờ; 700C trong 20 phút, 800C virus bị vô hoạt sau 5 phút.
Trong điều kiện lạnh từ -100C đến -200 C, virus có thể tồn tại rất lâu. Làm đông
khô các chất chứa virus không những có thể giữ virus nhiều năm mà còn không
làm mất độc lực của virus. Với pH môi trường: virus ổn định ở pH từ 5 - 10 và
bị bất hoạt khi pH < 3 hoặc pH > 10.
Với một số nhân tố hóa học, virus dịch tả vịt rất nhạy cảm với ete và chloroform. Dưới tác dụng của hai chất này, virus bị phá hủy. Kunst (1967) cho rằng Natri lauryl sulfate, Natridesoxycholate, Zephirol, Saponin có ảnh hưởng
với virus. Theo Nguyễn Thát (1975); Nguyễn Như Thanh (2001) thì cồn 750 diệt
virus trong 5-30 phút, acid phenic 0,5% diệt virus sau 30 phút. NaOH 2% vỡ
NH4OH 0,5% ở 220C cũng giết chết virus sau 30 phút.
Với một số enzym, Dardini and Hess (1968) cho biết virus dịch tả vịt bị các men Trypsin, Chimotrypsin, Lypase của tụy phá hủy.
Trong điều kiện tự nhiên, virus có thể tồn tại một thời gian khá dài tới 30 ngày (OIE, 2006), 5 ngày kể từ khi con vật cuối cùng chết vẫn có thể làm lây bệnh cho vịt khoẻ nếu nhốt nó vào chuồng cũ (Trần Minh Châu, 1987).
2.3.4. Độc lực
Đã xác định được một số chủng virus dịch tả vịt có độc lực khác nhau: Hà Lan có chủng O độc lực mạnh nhất, sau đó đến các chủng W59, W60, N (Jansen, 1968). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Việt Nam có chủng 769, 880 có độc lực mạnh nhất, sau đó là các chủng NH, NB, C, T (Trần Minh Châu, 1987).
Nguyễn Đức Hiền (2005) phân lập một chủng virus gây bệnh dịch tả vịt ở Cần Thơ và cho biết chủng virus này có độc lực cao, có khả năng gây bệnh và
gây chết vịt ở phòng thí nghiệm khi tiêm bắp với liều 103ELD50/ml.
Năm 2005, tác giả Nguyễn Ngọc Điểm cũng đã phân lập thành công chủng virus cường độc dịch tả vịt VG-2004.
2.3.5. Đặc tính nuôi cấy
Virus dịch tả vịt không có khả năng gây ngưng kết hồng cầu, không hấp thụ hồng cầu. Trong tế bào phôi gà, vịt bị nhiễm virus, virus hình thành tiểu thể bo hàm. Trong môi trường nuôi cấy tế bào, virus có khả năng hình thành Plaque. Khi có mặt bổ thể, kháng thể dịch tả vịt có khả năng làm tan tế bào xơ phôi vịt bị nhiễm virus (Lam, 1984)
2.3.5.1. Nuôi cấy trên phôi
Theo Nguyễn Như Thanh và cs (2001), nuôi cấy virus trên màng niệu đệm hoặc xoang niệu mô của thai vịt ấp 12 ngày, thai sẽ chết sau 4-6 ngày với các bệnh tích xuất huyết trên da vùng lưng, rìa cánh, đầu; gan và quả tối có điểm xuất huyết và hoại tử. Một số phôi có hiện tượng màng nhung niệu sưng dày.
Virus dịch tả vịt có thể cảm nhiễm với phôi ngỗng ấp 12 ngày tuổi và giết chết phôi sau 3-5 ngày. Virus cường độc dịch tả vịt ít mẫn cảm ở những lần cấy truyền đầu tiên trên phôi gà. Đối với phôi gà 9-10 ngày tuổi phải tiếp truyền virus sau ít nhất 12 đời liên tiếp virus mới thích nghi.
Qua nhiều lần cấy truyền virus trên phôi vịt, phôi gà độc lực của virus sẽ giảm dần với vịt. Người ta sử dụng những chủng virus nhược độc này qua phôi gà, phôi vịt để chế tạo vacxin.
2.3.5.2. Nuôi cấy trên tế bào
Virus dịch tả vịt có thể nuôi cấy trên môi trường tế bào phôi vịt, phôi gà một lớp và gây ra biến đổi bệnh lý cho tế bào (Jansen, 1968). Burgess and Yuil (1981) công bố virus dịch tả vịt có khả năng nhân lên trên loại tế bào xơ phôi vịt, xơ phôi ngan, gan phôi ngan, xơ phôi gà. Theo Ronald Atlanasio thì không quan sát thấy biến đổi bệnh lý tế bào khi nuôi cấy virus trên tế bào thận lợn dòng PK 15, tế bào WI-38, RD Hela, Hep-2, Vero, LleMK, BGM và BD (Trần Minh Châu, 1987).
vịt, sau 36 giờ có hiện tượng tế bào co tròn lại, thoái hoá và rụng khỏi thành bình tạo thành khoảng trống, xung quanh là những hợp bào (synciticum) như những dải đăng ten. Lớp tế bào này sẽ bị phá hủy hoàn toàn vào ngày thứ 4. Riêng đối với virus nhược độc chủng Jansen, virus rất thích ứng trên môi trường tế bào xơ phôi gà. Chỉ sau 24 giờ nuôi cấy virus, tế bào đã bắt đầu có hiện tượng hủy hoại. Tế bào bị biến dạng, co tròn, phình to ra, tập trung thành từng đám và có thể nhìn rõ dưới kính hiển vi quang học (Nguyễn Như Thanh và cs, 2001).
Trong các bình nuôi cấy virus ở nồng độ loãng, có thể phát hiện được Plague (những ổ tế bào bị virus gây hoại tử bằng cách nhuộm lớp tế bào với dung dịch fushin kiềm hoặc đỏ trung tính hoặc tím kết tinh (Nguyễn Lân Dũng và cs., 1972). Nếu nhuộm bằng fushin kiềm trong vài giây, sẽ quan sát thấy Plague hiện ra trên nền đỏ, hình tròn, bờ không gọn và có đường kính 1-2 mm (Trần Minh Châu, 1987).
Theo Dardini and Hess (1968) Plague của virus dịch tả vịt cường độc hình tròn, to nhỏ không đều, có đường kính từ 1-8 mm. Plague của virus dịch tả vịt nhược độc thì đều hơn, có bờ gọn và sáng, đường kính là 3-4 mm. Nguyễn Như Thanh và cs (2001) mô tả, với các chủng virus nhược độc, Plague đều, gọn và sáng rõ, ở ngày thứ 3 có đường kính 3 mm, sau 6 ngày là 4-7 mm và sau 14 ngày sẽ là 10 mm.
2.3.5.3. Nuôi cấy trên động vật thí nghiệm
Có thể dùng vịt con 21 ngày tuổi để nuôi cấy virus. 3-12 ngày sau vịt chết với triệu chứng, bệnh tích điển hình của bệnh. Ngoài vịt con có thể dùng ngan con, ngỗng con, gà con mới nở để gây bệnh.
2.4. MIỄN DỊCH CHỐNG VIRUS DỊCH TẢ VỊT 2.4.1. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu
Khả năng đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu của vịt đối với virus dịch tả vịt thể hiện bằng sự sản sinh các chất miễn dịch không đặc hiệu như interferon, tế bào diệt tự nhiên (Natural Killer cells) và bổ thể.
Interferonlà một chất do tế bào sinh ra có tác dụng ức chế sự nhân lên của
virus bằng cách giải thoát sự khống chế việc tổng hợp protein kháng virus. Protein này có khả năng khống chế sự phiên dịch các thông điệp của virus ở Ribosome của tế bào (Nguyễn Đường, 1990). Vacxin còn phát huy tác dụng ngay
cả khi vịt đã bị nhiễm virus dịch tả vịt cường độc trước khi tiêm vacxin dựa vào cơ chế sản sinh interferon. Nếu nhiễm virus cường độc dịch tả vịt trước 4 giờ thì trong 10 vịt được can thiệp bằng vacxin sẽ sống 8 con. Nếu can thiệp vacxin lúc vịt nhiễm virus trước 8 giờ, 15 vịt phát bệnh nhưng còn sống 3 con. Nếu vịt bị nhiễm bệnh từ 16 giờ trở lên, dù tiêm vacxin vịt vẫn không được bảo hộ (Jansen, 1968). Vai trò của interferon và hiện tượng cản nhiễm là cơ sở cho việc can thiệp vacxin vào ổ dịch để nhanh chóng dập tắt dịch. Tăng cường hoạt động diệt những tế bào đã bị nhiễm virus do chúng có một phần tử KIR (Killer cell Inhibitory Receptor) có tác dụng giúp chúng tiếp xúc với tế bào đích (tế bào bị nhiễm virus) làm ức chế tín hiệu hoạt hoá và dung giải tế bào đích (Vũ Triệu An, 1997). Bổ thể tạo điều kiện cho các tế bào thực bào bắt nuốt, tiêu diệt hoặc trình diện kháng nguyên thông qua cơ chế opsonin hóa virus.
2.4.2. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu
Biểu hiện của đáp ứng miễn dịch đặc hiệu là sự sản sinh ra kháng thể đặc hiệu chống virus khi cơ thể bị virus xâm nhập. Các công trình nghiên cứu về đáp ứng miễn dịch đặc hiệu trong bệnh dịch tả vịt đều tập trung xác định vai trò của các loại kháng thể được sinh ra và nguyên nhân, cách thức sản sinh ra các kháng thể đó.
2.4.2.1 . Sự hình thành kháng thể kháng virus dịch tả vịt
Miễn dịch chủ động tự nhiên được hình thành sau khi vịt mắc bệnh dịch tả vịt và đã khỏi bệnh thì vịt sẽ có kháng thể kháng virus dịch tả vịt trong cơ thể. Vịt khỏi bệnh có thể bị mắc trở lại ở thể ẩn, không có triệu chứng rõ. Khi gặp điều kiện thuận lợi, virus lại tiếp tục phát triển và gây bệnh (Trần Minh Châu, 1987).
Miễn dịch bị động tự nhiên được hình thành trên cơ sở kháng thể từ vịt mẹ truyền qua cho vịt con qua lòng đỏ trứng . Lượng kháng thể dịch tả vịt ở trong lòng đỏ cao hay thấp phụ thuộc vào hàm lượng kháng thể trong huyết thanh vịt mẹ. ở những vịt con một ngày tuổi, hàm lượng kháng thể dịch tả vịt trong máu xấp xỉ bằng hàm lượng kháng thể trong lòng đỏ. Theo thời gian, hàm lượng kháng thể sẽ giảm dần và chỉ tồn tại ở vịt con tối đa là tới ngày 21. Ngoài ra, dù vịt con có được hưởng kháng thể từ vịt mẹ, nhưng nếu bị nhiễm nhiều virus thì vẫn có thể bị chết vì bệnh dịch tả vịt. Như vậy, kháng thể do vịt mẹ truyền cho chỉ có thể bảo vệ được vịt con trong những ngày đầu sau khi nở nếu chúng bị
nhiễm một lượng virus rất ít (Fenner et al., 1974; Leibovitz, 1991). Vịt con được tiêm vacxin nhược độc dịch tả vịt lúc một ngày tuổi thì tỷ lệ miễn dịch bảo hộ giai đoạn 20-30 ngày tuổi chỉ đạt 25-50% (nếu là con của vịt mẹ được tiêm vacxin trước 6 tháng). Tỷ lệ miễn dịch bảo hộ của vịt con chỉ đạt 20-40% trong giai đoạn 10-20 ngày tuổi (nếu là con của vịt mẹ đã được tiêm vacxin 1 hay 2 lần). Còn với vịt con mà vịt mẹ không được tiêm vacxin thì tỷ lệ bảo hộ đạt 100% cho đến 45 ngày tuổi (Trần Minh Châu, 1986).
Miễn dịch chủ động nhân tạo được hình thành trên cơ sở sử dụng vacxin. Hiệu lực và độ dài đáp ứng miễn dịch phụ thuộc vào nhiều yếu tố như loại vacxin, đường đưa vacxin. Lượng kháng thể sinh ra lớn hơn khi tiêm nhắc lại
nhiều lần hoặc tiêm nhắc lại với số lượng lớn kháng nguyên (Fenner et al., 1974). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Tiêm bắp hoặc tiêm dưới da tạo ra đáp ứng miễn dịch nhanh và hiệu quả hơn các
phương pháp khác như nhỏ mắt và mũi (Shawky and Sandhu, 1997).
2.4.2.2. Các loại kháng thể chống virus dịch tả vịt
Kháng thể dịch thể: Ở vịt bị nhiễm virus dịch tả, kháng thể dịch thể được sinh ra trong những trường hợp vịt bị nhiễm bệnh tự nhiên thường thấp và chỉ tồn tại trong một thời gian ngắn. Vịt được tiêm vacxin nhược độc có kháng thể thấp còn vịt bị nhiễm virus cường độc thì hàm lượng kháng thể cao hơn.
Đáp ứng miễn dịch qua trung gian tế bào là phương thức bảo vệ chính của cơ thể chống lại virus thông qua những tế bào lympho độc Tc (Cytotoxic T lymphocyte, CTL). Guiping (2007) kết luận rằng, quá trình chết theo chương trình và hoại tử của tế bào lympho gây ra bởi sự tiêm truyền virus dịch tả vịt dẫn đến sự phân huỷ tế bào lympho. Sự chết theo chương trình của tế bào lympho có thể đóng vai trò quan trọng trong sinh bệnh học của bệnh dịch tả vịt. Một số vịt sau khi được tiêm vacxin có hàm lượng kháng thể dịch thể rất thấp nhưng khi đem thử thách với virus dịch tả vịt cường độc thì vẫn được bảo hộ.
2.4.3. Độ dài miễn dịch
Khi đưa vacxin vào cơ thể, kháng thể chưa sinh ra ngay lập tức mà phải sau một thời gian tiềm tàng, dài hay ngắn phụ thuộc vào kháng nguyên chứa trong vacxin và sự xâm nhập của kháng nguyên vacxin lần đầu hay lần thứ hai. Sau đó kháng thể mới được sinh ra, lượng kháng thể tăng dần, đạt mức cao nhất sau 2-3 tuần rồi giảm dần và mất đi sau vài tháng hoặc vài năm.
phát. Sử dụng vacxin lần hai đáp ứng miễn dịch gọi là thứ cấp hay thứ phát. Trong đáp ứng miễn dịch thứ phát, thời gian tiềm tàng ngắn hơn, lượng kháng thể sinh ra nhiều hơn và thời gian xuất hiện kháng thể sớm hơn.
Sự khác biệt của đáp ứng miễn dịch sơ cấp và thứ cấp là do vai trò của các tế bào nhớ miễn dịch. Trong đáp ứng miễn dịch thứ cấp, các tế bào này phát triển nhanh và mạnh, tạo ra một lớp tế bào sản xuất kháng thể nhanh và nhiều hơn nên kháng thể xuất hiện sớm, hàm lượng nhiều hơn rõ rệt. Nếu cách lần dùng vacxin đầu 3-4 tuần, sử dụng tiếp lần thứ hai thì đáp ứng miễn dịch sẽ nhanh hơn, mạnh hơn, có thể gấp hàng trăm lần và thời gian miễn dịch dài hơn. Đây là cơ sở khoa học cho việc tiêm phòng vacxin nhắc lại tạo mức độ miễn dịch cao cho cơ thể.
Khi kiểm tra hàm lượng kháng thể trong cơ thể đã sử dụng vacxin kết hợp với phương pháp công cường độc, người ta nhận thấy rằng không phải kháng thể cứ xuất hiện trong máu là con vật được bảo vệ khỏi sự tấn công của mầm bệnh cường độc mà lượng kháng thể phải đạt đến một trị số nhất định thì cơ thể mới có mức độ miễn dịch bảo vệ. Trị số kháng thể này được gọi là ngưỡng bảo hộ. Hàm lượng kháng thể càng cao hơn ngưỡng bảo hộ thì mức độ miễn dịch của cơ thể