5. Một số chất sử dụng trong môi trường chọn lọc để nuôi cấy vi sinh vật
2.2.8. Phương pháp đánh giá khả năng ức chế của Cefotaxime đến sự phát triển
Thí nghiệm khảo sát khả năng chuyển/nhận gen kháng kháng sinh Cefotaxime được thực hiện trong môi trường thạch nên nghiên cứu tiến hành đánh
giá ảnh hưởng của kháng sinh Cefotaxime đến sự phát triển của vi khuẩn trên môi trường thạch.
* Phương pháp thực hiện được tóm tắt như sau:
- Chủng vi sinh vật lấy từ khuẩn lạc mọc riêng rẽ được hoạt hóa trong 5ml môi trường NB ở 370C, 120 vòng/phút trong 16-20 giờ.
- Chuẩn bị các đĩa petri chứa môi trường MHA vô trùng có bổ sung
kháng sinh tương ứng với nồng độ tăng gấp đôi từ 4µg/mL đến
16µg/mL.
- Cấy ria các chủng vi sinh vật đã được nuôi lỏng qua đêm lên các đĩa petri đã chuẩn bị lần lượt từ đĩa chứa nồng độ kháng sinh thấp nhất đến nồng độ kháng sinh cao nhất. Sau đó các đĩa được đem đi nuôi ở
370C trong 16-20 giờ.
- Sau thời gian nuôi, tiến hành đánh giá khả năng phát triển của vi sinh vật ở các nồng độ kháng sinh và lựa chọn được nồng độ thích hợp ức chế sự phát triển của chủng Bacillusmà có thể nhìn thấy bằng mắt thường.
* Khảo sát khả năng sống sót của chủng vi sinh vật trong môi trường M3
Các bước tiến hành:
- Chủng vi sinh vật lấy từ khuẩn lạc mọc riêng rẽ được hoạt hóa trong 5ml môi trường NB ở 370C, 120 vòng/phút trong 16-20 giờ.
- Dịch sau hoạt hóa được đem đi xác định OD tại bước sóng 600nm và
được pha loãng đến nồng độ khoảng 106 CFU/ml.
- Hút 100µl canh trường vi khuẩn nồng độ 106 CFU/ml đĩa petri chứa môi trường MHA có bổ sung Cefotaxime với nồng độ thích hợp. Đem đi nuôi ở 370C trong 16-20 giờ.
- Tiếp tục pha loãng canh trường vi khuẩn đến nồng độ thích hợp và
chang trên môi trường MHA làm mẫu kiểm chứng.
- Sau thời gian nuôi, tiến hành đánh giá tính nhạy cảm của các chủng vi sinh vật với nồng độ kháng sinh đó.
- Từ đó, ta xác định môi trường chọn lọc để ức chế sự phát triển của các chủng Bacillus.