4. Bố cục của luận văn
2.4.4.2.Xét nghiệm ký sinh trùng sốt rét
- Phát hiện KSTSR bằng phươmg pháp chuẩn vàng nhuộm giêm sa theo
kỹ thuật thường quy của TCYTTG (WHO, 2014).
- Phương pháp lấy lam máu nhuộm giêm sa soi kính hiển vi phát hiện
KSTSR là kỹ thuật cổ điển, được áp dụng rộng rãi và được TCYTTG xác nhận là chuẩn vàng trong các kỹ thuật phát hiện KSTSR;
- Dụng cụ, hóa chất:
+Kim chích máu dạng lancet hoặc autolet tự động, găng tay vô trùng, lam máu chuyên dụng sạch, lam kéo, giá lam;
+Hộp petri, bông khô, bông cồn, phiếu xét nghiệm;
+Bút chì, bút bi xanh, bút bi đỏ, khay men, ống đong, pipet chia độ, cốc có mỏ 50ml, l00ml, đồng hồ báo giờ, kính hiển vi quang học, dầu soi kính;
+Bộ máy đếm KSTSR.
- Kỹ thuật tiến hành xét nghiệm theo chuẩn vàng giêm sa:
+Hỏi và ghi các thông tin vào phiếu xét nghiệm;
+Sát trùng đầu ngón tay, hoặc ngón chân cái, gót chân trước khi chích máu;
+Cho máu vào lam: Lấy 1 giọt máu tương đương l mm3 vào giữa lam (làm giọt mỏng), lấy 3 giọt, mỗi giọt tương đương 1 mm3 vào ¼ lam còn lại (làm giọt dày). Làm khô lam máu bằng cách để khô tự nhiên;
+Ghi số hiệu lam: dùng bút chì ghi số hiệu lam, ngày lấy máu vào phần đầu của giọt máu đàn;
+Nhuộm lam máu: Pha nồng độ giêm sa 4% nhuộm thường quy: 1 lam
giọt dày cần lml dung dịch giêm sa nhuộm 1 lam giọt mỏng cần 1,5 ml dung dịch giêm sa nhuộm. Từ đó tính ra số ml dung dịch giêm sa mẹ, số ml dung dịch đệm pH 7,2 cần pha cho số lượng tiêu bản;
- Kỹ thuật nhuộm chuẩn theo quy trình Tổ chức Y tế thế giới (WHO,
2010):
+Với giọt mỏng: cố định giọt mỏng bằng cách nhỏ cồn methylic trùm kín lên giọt mỏng;
+Với giọt dày, máu lấy lâu hơn 3 ngày, mốc, bẩn hoặc quá dày phải dung giải trước khi nhuộm bằng cách nhỏ dung dịch giêm sa lên giọt dày, để 1-2 phút, lắc nhẹ, đổ đi rồi để khô;
+ Xếp lam lên giá: chọn giá lam thật phẳng, xếp lam cách nhau 0,5 cm, giọt máu đàn quay về một phía;
+ Nhỏ hết dung dịch giêm sa nhuộm đã pha phủ kín hết giọt máu (không có bọt và không tràn ra mép lam);
+ Để thời gian 40-45 phút, rửa tiêu bản bằng cách quay giọt máu đàn về phía vòi nước, không đổ giemssa nhuộm trước khi rửa. Rửa dưới vòi nước chảy nhẹ cho đến khi nước trong (lam cách vòi nước khoảng 5 cm). cắm tiêu bản lên giá cài để khô tự nhiên rồi đem soi dưới kính hiển vi quang học;
+ Soi tiêu bản: Soi bằng vật kính dầu có độ phóng đại 100 x, thị kính l0 x như sau: nhỏ 1 giọt dầu vào giọt dày và 1 giọt dầu vào phần đuôi của giọt mỏng, đặt tiêu bản lên kính, soi giọt dày trước, giọt mỏng sau, soi phát hiện KSTSR ở giọt dày và định loại KSTSR ở giọt mỏng.
+ Soi 100 vi trường trển tiêu bản giọt dày nếu phát hiện được KSTSR thì dừng soi và trả lời kết quả. Soi 200 vi trường trong thời gian 10 phút trên tiêu
bản giọt dày không thấy KSTSR mới kết luận âm tính.
+Đánh giá mật độ KSTSR/mm3 máu (dựa vào số lượng bạch cầu chuẩn) Số lượng KSTSR đếm được x số lượng BC chuẩn KSTSR/ mm3 máu = ---
Số lượng BC đếm được
(Số lượng bạch cầu chuẩn được quy định khoảng 8.000 BC/ mm3 máu).