FC2A (45,5 g) FC2B (5 g) FC2C (9,8 g) FC2D (10 g) Silica gel CC, CM (50:1–1:1, v/v) FC10 (12 mg) Silica gel CC, CM 6/1 YMC CC, MN 3/1 FC6 (5,0 mg) FC7 (11,5 mg) FC5 (6,0 mg) FC8 (10 mg) Silica gel CC CMN 6/1/0.07 YMC CC CM 30/1 FC1A (30,5 g) (16,4 g) FC1B (18,0 g) FC1C (10,1 g) FC1D Silica gel CC, HA (100:1–1:1, v/v) FC4 (12 mg) Silica gel CC CM 30/1 FC9 (5,6 mg) FC11 (7,0 mg) Silica gel CC, CM 20/1 YMC CC, AN 5/1
Cặn chiết cloroform được tiến hành phân tách thô trên sắc ký cột silica gel pha thường gradient n-hexane–acetone (100:1–1:1, v/v) thu được bốn phân đoạn: FC1A (30,5 g), FC1B (16,4 g), FC1C (18,0 g) và FC1D (10,1 g). Phân đoạn FC1B được tiếp tục phân tách trên sắc ký cột silica gel pha thường sử dụng hệ dung môi rửa giải CHCl3–MeOH (30:1, v/v) thu được hợp chất FC4 (12,0 mg). Tiếp tục phân tách phân đoạn FC1C bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CH2Cl2– MeOH (20:1, v/v), kết hợp với sắc ký cột silica gel pha đảo YMC RP-18 sử dụng hệ dung môi rửa giải acetone–nước (5:1, v/v) thu được các hợp chất FC9 (5,6 mg) và
FC11 (7,0 mg).
Hình 2.6. Sơ đồ và phân lập các hợp chất từ lớp nước
Phân đoạn FC2 được phân tách thành bốn phân đoạn nhỏ FC2A-FC2D bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải gradient CHCl3–MeOH (50:1–1:1, v/v). Tinh chế phân đoạn FC2B bằng sắc ký cột silica gel pha đảo YMC RP-18 sử dụng hệ dung môi rửa giải acetone–MeOH (8:1, v/v) thu được hợp chất FC10 (12 mg). Tiếp tục phân tách phân đoạn FC2C trên sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CHCl3–MeOH (6:1, v/v), kết hợp với sắc ký cột silica gel pha đảo rửa giải bằng MeOH–H2O (3:1, v/v) thu được hai hợp chất FC6 (5,0 mg) và FC7 (11,5 mg).
Lớp nước - FC3 (127,5 g) FC3B1 (30,5 g) (16,4 g) FC3B2 FC3B3 (18,0 g) Silica gel CC, HA (100:1–1:1, v/v) FC3A (25 g) FC3B (65 g) FC3C (5 g) FC3D (5,5 g) Diaion CC, MN (0/10, 2,5/7,5, 5/5, 75/25, 10/0, v/v) FC2 (5,0 mg) (8 mg) FC3 YMC CC AMN 1/2/2 FC12 (14 mg) Silica gel CC CMN 5/1/0,1 FC1 (4 mg) YMC gel CC CAN 1/2,5/0,1
Phân đoạn FC2D được tinh chế bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CH2Cl2–MeOH–H2O (6:1:0,07, v/v/v) thu được các hợp chất FC5 (6,0 mg) và FC8
(10.0 mg).
Lớp nước được tiến hành phân cắt thô trên sắc ký cột trao đổi ion Diaion HP- 20 rửa giải tăng dần nồng độ MeOH trong nước (100% H2O, 25% MeOH, 50% MeOH, 75% MeOH và 100% MeOH) thu được bốn phân đoạn FC3A–FC3D. Phân đoạn FC3B được phân tách thành ba phân đoạn nhỏ hơn FC3B1–FC3B3, bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CHCl3–MeOH–H2O (5:1:0,1, v/v/v). Tinh chế phân đoạn FC3B2 bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CH2Cl2– MeOH–H2O (5:1:0,1, v/v/v) thu được hợp chất FC12 (14,0 mg). Hợp chất FC1 (4,0 mg) được tinh chế từ phân đoạn FC3B3 sử dụng sắc ký cột silica gel pha đảo rửa giải bằng CH2Cl2–acetone–H2O (1:2,5:0,1, v/v/v). Tiếp tục phân tách phân đoạn FC3D bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CH2Cl2–MeOH–H2O (6:1:0,05, v/v/v), kết hợp với sắc ký cột silica gel pha đảo rửa giải bằng acetone– MeOH–H2O (1:2:2, v/v/v) thu được các hợp chất FC2 (5,0 mg) và FC3 (8,0 mg).
b. Phương pháp phân lập các hợp chất trao đổi thứ cấp từ cây Đa lông F. drupacea F. drupacea
Mẫu lá khô cây Đa lông F. drupacea (3,0 kg) được chiết 3 lần bằng MeOH ở nhiệt độ phòng thu được 200 g cặn chiết. Cặn này được hòa vào nước cất (1 lít) và chiết phân bố lần lượt với n-hexane và ethyl acetate (EtOAc) thu được các cặn chiết
n-hexane (FD1, 100,0 g), EtOAc (FD2, 37,0 g) và lớp lước (FD3).
Cặn n-hexan FD1 (100,0 g) được phân tách thô trên sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải gradient n-hexane–acetone (40:1 →1:1, v/v) thu được 5 phân đoạn, FD1A (30,0 g), FD1B (10,0 g), FD1C (17,0 g), FD1D (8,5 g) và FD1E (24,5 g). Một phần của phân đoạn FD1B (2 g) được tiếp tục phân tách trên sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CHCl3–acetone (10:1, v/v) thu được hợp chất FD10
(8,0 mg). Phân đoạn FD1C (17,0 g) được phân tách thành 3 phân đoạn nhỏ hơn, FD1C1 (6,2 g), FD1C2 (4,5 g) và FD1C3 (5,3 g), bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CHCl3–MeOH (15:1, v/v). Một phần của phân đoạn FD1C1 (1
g) được tinh chế bằng sắc ký cột silica gel pha đảo sử dụng hệ dung môi rửa giải MeOH–nước (8:1, v/v) thu được các hợp chất FD7 (12,0 mg), FD8 (9,0 mg) và
FD9 (8,5 mg). Tương tự, 1,0 g phân đoạn FD1C2 được tinh chế bằng sắc ký cột silica gel pha thường rửa giải bằng CHCl3–acetone (4:1, v/v) thu được các hợp chất
FD4 (30,0 mg) và FD6 (150,0 mg). Các hợp chất FD1 (30,0 mg) và FD2 (50,0 mg) được tinh chế từ phân đoạn FD1C3 (5,3 g) bằng sắc ký cột silica gel pha đảo sử dụng hệ dung môi rửa giải MeOH–nước (4:1, v/v).
Hình 2.7. Sơ đồ chiết phân đoạn mẫu cây Đa lông - F. drupacea và phân lập các hợp chất từ cặn chiết n-hexane