3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn
2.3.2. Phương pháp pha hóa chất
- Dung dịch nước muối sinh lý 0,85% có pH 7,2:
Hòa tan 8,5 gam NaCl vào 100 µL nước cất, hấp cao áp tiệt trùng ở nhiệt độ 121oC trong 15 phút (có thể mua dung dịch nước muối sinh lý do ngành y tế cung ứng).
- Dùng dung dịch chống đông máu:
Hòa tan 8,3 gam Natri Citrate vào 200 µl nước cất, hấp cao áp tiệt trùng ở nhiệt độ 121oC trong 15 phút.
- Huyễn dịch hồng cầu ngan 1%:
Lấy máu ngan trưởng thành, khỏe mạnh.
Hút máu ngan vào bình tam giác đã có sẵn 5 µL đến 10 µL dung dịch chống đông máu (Natri citrate 3,8%).
Rửa hồng cầu: cho dung dịch nước muối sinh lý (NaCl 0,85%) vào ống lấy máu với lượng gấp đôi lượng máu trong ống, lắc đều, ly tâm từ 1500 - 2000 vòng/phút trong vòng 10 phút, đổ bỏ huyết tương ở trên.
Rửa như trên 2 đến 3 lần. Sau lần ly tâm lần cuối thì bỏ một phần dung dịch ở trên để lấy hồng cầu.
Pha hồng cầu thành huyễn dịch 1%: hút 1 µL hồng cầu pha với 99 µL nước muối sinh lý.
Bảo quản huyễn dịch hồng cầu ở nhiệt độ 4 oC đến 8 oC. Hồng cầu sau khi pha có thể dùng trong 1 tuần (nếu dung dịch hồng cầu bị dung huyết thì loại bỏ).
- Phương pháp tạo huyết thanh chuẩn:
Để tiến hành phản ứng SSDHI cần một lượng kháng huyết thanh chuẩn có hiệu giá không đổi 4log2 (HI) để xử lý hết các mẫu.
Tiến hành HI (phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu) với kháng huyết thanh chống dại (SAR) tinh chế mua từ ngành y tế, xác định hiệu giá kháng thể trong kháng huyết thanh đó và pha kháng huyết thanh chuẩn có hiệu giá 4log2 HI (16 đơn vị ngăn ngưng kết hồng cầu), như sau:
+ Với kháng huyết thanh đạt hiệu giá 5log2 thì pha theo tỷ lệ 1:1 (1/(1+1)=1/2); +Với kháng huyết thanh đạt hiệu giá 6log2 thì pha theo tỷ lệ 1:3;
+ Với kháng huyết thanh đạt hiệu giá 7log2 thì pha theo tỷ lệ 1:7; + Với kháng huyết thanh đạt hiệu giá 8log2 thì pha theo tỷ lệ 1:15…
Kháng huyết thanh sau khi được pha với hiệu giá chuẩn 4log2 sẽ được cho vào ống Eppendorf (1µL/ống) và được bảo quản ở -20oC.