3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài nghiên cứu
2.3.4. Phương pháp hóa sinh
2.3.4.1. Xác định hàm lượng acid tổng số [27]
Hàm lượng acid trong cà chua được xác định theo phương pháp trung hòa bằng NaOH 0,1N với chất chỉ thị phenolphtalein. Cách tiến hành được mô tả ở phụ lục 2, mục 2.5.
2.3.4.2. Xác định hàm lượng đường tổng số [27]
Hàm lượng đường tổng số được xác định theo phương pháp Bertrand, nguyên tắc chung của phương pháp này là dựa vào khả năng oxy hóa khử giữa đường khử với ion kim loại trong môi trường có tính kiềm. Cách tiến hành được mô tả ở phụ lục 2, mục 2.4.
2.3.4.3. Xác định hàm lượng vitamin C [6][27]
Hàm lượng vitamin C được xác định theo phương pháp chuẩn độ với iod 0,01 N với chỉ thị hồ tinh bột. Cách tiến hành được mô tả ở phụ lục 2, mục 3.6.
2.3.4.4. Xác định cường độ hô hấp [26]
Để xác định cường độ hô hấp của quả, sử dụng thiết bị phân tích nồng độ khí CO2 ICA 250 của hãng Dual Analyser, Nhật Bản sản xuất.
Nguyên tắc: Cường độ hô hấp của quả là số ml khí CO2 tạo thành do quả hô hấp trong một đơn vị thời gian trên một đơn vị khối lượng quả.
Cách tiến hành: được trình bày ở mục 2.7 phụ lục 2 Tính kết quả:
R = 𝑉𝑡𝑑×%𝐶𝑂2×10
𝑚𝑞×𝑇 ; (ml CO2.kg-1.h-1) Trong đó:
R : cường độ hô hấp của quả; (ml CO2.kg-1.h-1) Vtd : thể tích tự do của hộp ( Vtd = Vhộp - Vquả); (ml) % CO2 : nồng độ % CO2 đo được trên máy
T : thời gian từ lúc đậy công thức đến lúc đo; (h) mq : khối lượng công thức đem đo; (kg)
2.3.4.5. Xác định mức độ sản sinh ethylene [26]
Hàm lượng ethylene được xác định trên máy đo ethylene ICA 56 do hãng Dual Analyser, Nhật Bản sản xuất.
Nguyên tắc: khí ethylene sinh ra trong các mẫu cà chua bảo quản được hút vào thiết bị đo ethylene ICA 56 nhờ hệ thống bơm hút qua màng chắn nước vào trong một buồng kín, trong đó có gắn bộ phận cảm biến (sensor) nhạy cảm với nồng độ ethylene dù ở mức rất thấp (0,2 ppm). Những thông tin về hàm lượng ethylene tạo thành này được bộ phận cảm biến trong thiết bị ICA 56 chuyển vào máy tính và trên màn hình sẽ có dữ liệu về hàm lượng ethylene nội sinh tạo thành trong quá trình bảo quản hay quá trình chín của rau quả.
Cách tiến hành: được trình bày ở mục 2.8 phụ lục 2. Tính kết quả:
E = 𝑒×𝑉𝑡𝑑
𝑚𝑞×𝑇 ; (l C2H4.kg-1.h-1) Trong đó:
E : cường độ sản sinh ethylene ; (l C2H4.kg-1.h-1) Vtd : thể tích tự do của hộp ( Vtd = Vhộp - Vquả); (ml) e : nồng độ ppm của C2H4
T : thời gian từ lúc đậy công thức đến lúc đo; (h) mq : khối lượng công thức đem đo; (kg)
2.3.4.6. Xác định hàm lượng acid 1-aminocyclopropane-1-carboxylic
Xác định hàm lượng ACC theo phương pháp cải tiến của Lizada và Yang (1979) [51].
Nguyên tắc: hàm lượng ACC - chất tiền thân trực tiếp của ethylene có trong mô quả cà chua được xác định dựa trên nguyên lý sự giải phóng ra ethylene từ cơ chất ACC với NaOCl trong sự có mặt của thủy ngân (Hg2+). Hàm lượng ethylene tạo thành được xác định bằng thiết bị đo nồng độ khí ethylene ICA 56.
Hiệu suất của phản ứng chuyển hóa từ ACC đến ethylene thông thường đạt 80%. Phương trình phản ứng:
Cách tiến hành: được trình bày ở mục 3.10 phụ lục 3. Tính kết quả:
E = 𝑉𝑡đ׉𝐶2𝐻4
𝑚𝑞×22,4 x 0,8 ; (nmol C2H4.g-1) Trong đó:
E : hàm lượng ACC; (nmol C2H4.g-1)
Vtd : thể tích tự do của hộp ( Vtd = Vhộp - Vquả); (ml)
‰ C2H4 : giá trị của không khí có trong hộp, giá trị này bằng ‰ C2H4 trong máy đọc được trừ đi ‰ C2H4 có trong khí quyển được máy phân tích ở mẫu trắng
mq : khối lượng mẫu đem đi phân tích; (g)
NH2 CO O- HO- C NH COO- COO- COO- OCl -C2H4 -Cl- OH- OH - NH-Cl CO O- - -NH3
2.3.4.7. Xác định hoạt lực enzyme aminocyclopropane carboxylate oxydase
Hoạt lực của ACC oxydase được xác định theo phương pháp cải tiến của Moya - Léon và John (1994) [58].
Nguyên tắc: enzyme nội bào xúc tác phản ứng xảy ra trong một khoảng thời gian nhất định. Sau khi phản ứng kết thúc, tiến hành xác định hàm lượng cơ chất mất đi hay lượng sản phẩm tạo thành nhằm xác định hoạt lực của enzyme nội bào.
Cơ chất chính của phản ứng là ACC (1-aminocyclo-propane-1- cacboxylate acid). Enzyme nội bào tham gia xúc tác (ACC oxydase) và sản phẩm chính tạo thành là ethylene.
Phương trình phản ứng xảy ra như sau:
Cách tiến hành: được trình bày ở mục 3.9 phụ lục 3.
Tính kết quả:
E = 𝑉𝑡đ׉𝐶2𝐻4
𝑚𝑞×𝑇 ×22,4 x 0,8 ; (nmol C2H4.g-1) Trong đó:
E : hàm lượng ACC; (nmol C2H4.g-1)
Vtd : thể tích tự do của hộp ( Vtd = Vhộp - Vquả); (ml)
‰ C2H4 : giá trị của không khí có trong hộp, giá trị này bằng ‰ C2H4 trong máy đọc được trừ đi ‰ C2H4 có trong khí quyển được máy phân tích ở mẫu trắng.
mq : khối lượng mẫu đem đi phân tích; (g) T : thời gian từ lúc đậy mẫu đến lúc đo; (h)