- Nấm mốc được nuôi 2 ngày trên môi trường PDA.
- Dùng que cấy thu sinh khối nấm mốc cho vào ống ống Eppendorf có chứa 750 µl SSC 2x để loại bỏ protein và RNA. Sau đó đem đun ở 100°C trong 10 phút và ly tâm 12000 rpm trong 1phút ở 20°C.
- Bỏ dịch, giữ phần sinh khối, thêm vào 750 µl nước cất để rửa sạch tế bào và ly tâm 12000 rpm trong 1 phút ở 10°C. Bỏ phần dịch và giữ lại phần sinh khối.
- Dùng que cấy chuyển phần sinh khối này sang ống ống Eppendorf mới có chứa hạt thủy tinh (đường kính 0.2 – 0.5 mm, Roth) và 150 µl phenol: chloroform (tỉ lệ 1:1) và 100 µl nước cất.
- Đưa vào máy phá tế bào trong 2 phút. Sau đó li tâm ở 12000 rpm trong 10 phút ở 10°C.
- Sử dụng kit Silica Bead DNA gel extraction (Thermo Scientific) gồm: Binding Buffer, Silica và Washing buffer để tinh chế DNA. Pha 150 µl Binding Buffer với 0.5 µl Silica được dịch silica milk sử dụng để tinh sạch DNA.
- Lấy 150 µl silica milk trộn đều với 50 µl phần dịch trong sau khi phá tế bào. Giữ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút, để DNA bám vào hạt silica. Ly tâm 12000 rpm trong 1phút ở 10°C, thu kết tủa.
- Kết tủa được rửa với 500 µl washing buffer (hoặc ethanol 70%), sau đó ly tâm 12000 rpm trong 1phút. Lặp lại 3 lần để thu DNA sạch.
- Để khô phần kết tủa trong 30 phút ở 30°C. Bổ sung 15µl nước PCR và ủ ở 50°C trong 5 phút (để DNA rời ra khỏi hạt silica). Ly tâm 12000 rpm trong 1 phút. Thu được dịch DNA và đem giữ lạnh. [74]