- gen điều hoà operator
G AATTC C T T A A
5.1- KHÁI NIỆM VỀ VECTOR
5.1.1- Sự chuyển gen
Việc nghiờn cứu một gen xỏc định ở sinh vật eucaryote gặp phải nhiều khú khăn, vỡ gen đú chỉ là trỡnh tự nhỏ nằm lọt trong toàn bộ gen cú kớch thước lớn. Để thu nhận lượng gen tinh sạch với hàm lượng lớn người ta phải chuyển và tạo dũng gen đú.
Để chuyển gen từ tế bào A (tế bào cho) sang tế bào B (tế bào nhận) chỉ
cú thể thực hiện bằng cỏch đớnh cỏc gen cần chuyển vào một yếu tố trung gian
được gọi là đoạn dẫn.
Những đoạn dẫn này cú khả năng hướng dẫn, vận chuyển cỏc đoạn gen cần nghiờn cứu vào tế bào nhận. Đoạn dẫn này chớnh là cỏc vector chuyển gen.
5.1.2- Vector
Vector là phõn tử DNA nhỏ (ngắn) dạng thẳng hoặc dạng vũng, trong
đú, người ta sẽ cài một mảnh DNA (gen quớ) cần nghiờn cứu. Những mảnh DNA đó được cài gọi là đoạn cài (insert) hoặc DNA ngoại lai hoặc DNA lạ.
Cỏc phõn tử DNA nhỏ này thường là những thực khuẩn thể hoặc cỏc plasmid mà trong bộ gen của chỳng cú tớn hiệu cần thiết cho chỳng tỏi bản, nhưng chỳng lại khụng biết tỏi bản (sinh sụi nẩy nở) một mỡnh. Chỳng cần
đưa vào trong cỏc tế bào chủ (vớ dụ như tế bào vi khuẩn chẳng hạn). 5.2-NHỮNG YấU CẦU TỐI THIỂU CỦA MỘT VECTOR CHUYỂN GEN
Vector phải cú một vựng nhận biết đối với một enzyme giới hạn loại II. Vựng này sẽ là vựng cài lắp một DNA (gen cần nghiờn cứu) đó được xử lý bởi cựng enzyme giới hạn. Thật vậy, mỗi một RE tạo ra một đầu so le riờng, cú khả năng gắn với một đoạn DNA mang đầu so le tương ứng. Hơn nữa, cỏc vựng nhận biết này thường được đặt vào giữa cỏc gen chỉ thị để tiện theo dừi
sự biểu hiện hoạt động của gen tỏi tổ hợp. Thụng thường, đú là những gen khỏng khỏng sinh, hoặc gen mó húa tổng hợp enzyme cú khả năng chuyển hoỏ cơ chất tạo màu dễ phỏt hiện trờn mặt thạch.
Vector phải tồn tại trong tế bào chủ qua nhiều thế hệ và ớt gõy xỏo trộn trong tế bào chủ.
Vector cú kớch thước càng nhỏ càng tốt để thu nhận lượng DNA tối đa và dễ biến nạp vào tế bào chủ.
Vector phải cú khả năng tự sao chộp tớch cực trong tế bào chủ, khụng phụ thuộc vào sự sao chộp bộ gen của tế bào chủ.
Đảm bảo sự di truyền bền vững của một DNA tỏi tổ hợp.
Chỳng khụng cú khả năng sống sút ngoài tế bào chủ và khụng chuyển vào tế bào chủ khỏc bằng con đường tiếp hợp.
Cú trỡnh tự điều hoà tạo điều kiện thuận lợi cho việc phiờn mó của gen
được đưa vào.
Khả năng biến nạp lớn nghĩa là cú khả năng thấm tốt vào tế bào chủ
của vector mang gen tỏi tổ hợp.
Dễ theo dừi sự biểu hiện của gen tỏi tổ hợp, yờu cầu này là cần thiết cho việc phỏt hiện dũng cần tỡm.
Tinh chế dễ dàng với khối lượng lớn bản sao của gen gắn vào vector. Ngày nay cỏc vector chuyển gen ngày càng hoàn thiện và tiện lợi cho việc sử dụng. Khụng cú vector nào toàn năng cho sự chuyển gen mà cần cú sự
lựa chọn tựy đối tượng và tựy kớch thước đoạn gen cần tạo dũng. Chỳng được cấu tạo với nhiều tớnh chất chuyờn biệt để mang được cỏc trỡnh tự nucleotide như mong muốn.