Cụng nghệ thu dầu gấc cho đến nay đều qua cỏc bước cơ bản sau:
2.3.3 Phần thực nghiệ m:
- Quả gấc sau khi được thu hỏi thỡ được bổ ra. Ruột gấc sau khi tỏch ra khỏi quả gấc thỡ cho ngay vào mỏy chà, bật mỏy cho que khuấy đó được lắp thanh chà hoạt động. Thanh chà sẽ chà tỏch màng gấc ra khỏi hạt. Màng gấc khi tỏch ra khỏi hạt được lọc qua lưới lọc ra ngoài. (xem phần 2.1.2)
- Sau đú màng gấc được đem đi nghiền nhỏ, thật nhuyễn nhằm làm cho cỏc thành phần được trộn lẫn đồng đều vào nhau.
- Cõn chớnh xỏc 3 mẫu : mỗi mẫu 2g để thực hiện theo 3 phương phỏp Phương phỏp 1 : Phương phỏp của Nguyễn Tường Vy (23)
Phương phỏp 2 : Phương phỏp của Ishida (5) Phương phỏp 3 : Phương phỏp mới
Phương phỏp 1 : Mẫu 1 : Tiến hành ộp lấy dầu gấc. Cho lượng dầu gấc vào bỡnh định mức 20ml, thờm 15ml ether dầu mỏ (40 – 600C), lắc kĩ cho tan, thờm ether dầu mỏ đến vạch. Hỳt chớnh xỏc 2,0ml dung dịch
này, chuyển vào 1 cột thủy tinh (hoặc nhựa) cú chứa 1g bột nhụm oxyd ( đó được hoạt húa ở 1200C trong 3 giờ). Cho 20ml ether dầu mỏ (40 – 600C) chảy qua cột với tốc độ khoảng 30 – 35 giọt/phỳt. Hứng lấy dịch chiết ether dầu mỏ, tiếp tục cho 30ml dicloromethan chảy qua với tốc độ như trờn. Gộp dịch chiết dicloromethan vào dịch chiết ether dầu mỏ, để bay hơi tự nhiờn đến cạn. Dựng dicloromethan để hũa tan và chuyển toàn bộ cặn vào bỡnh định mức thủy tinh màu nõu 10ml, thờm dicloromethan đến vạch, lắc đều, lọc qua giấy lọc cỡ 0,45àm, thu được mẫu cần phõn tớch.
Phương phỏp 2 : Mẫu 2 :
- Lấy 5ml thể tớch methanol (MeOH) lạnh cho vào cốc đong. Cho màng gấc vào cốc. Ngõm trong vũng 20 phỳt. Sau đú dựng mỏy lọc hỳt chõn khụng, hỳt lấy dịch chiết methanol ra. Thu lấy phần bó.
- Tiếp tục cho phần bó trờn vào 5ml diclomethan. Ngõm trong vũng 20 phỳt. Rồi dựng mỏy lọc hỳt chõn khụng hỳt lấy dịch chiết diclomethan ra. Làm như vậy 3 lần.
- Gộp dịch chiết methanol và dịch chiết diclomethan với nhau rồi thờm 5ml nước. Cho hỗn hợp đú vào phễu chiết. Để 20 phỳt để xuất hiện hiện tượng phõn lớp.
- Thu lấy phần diclomethan dưới cựng, cho vào bỡnh cầu đem cụ cất chõn khụng. Ta thu được dầu gấc.
- Đem hũa tan trong THF rồi mang đi phõn tớch.
Phương phỏp 3 : mẫu 3
Chiết : Dựng hỗn hợp: acetone : etanol : n hexan= 2:2:6 - Lấy hỗn hợp A gồm : aceton : 3ml
Etanol : 3ml N hexan 9ml
- Lấy 5ml thể tớch hỗn hợp A trờn cho vào cốc đong. Cho mẫu màng gấc vào cốc. Ngõm trong 20 phỳt. Rồi chiết thu lấy dịch chiết. Làm như vậy 3 lần. Thu lấy tổng dịch chiết.
- Cho toàn bộ dịch chiết vào phễu chiết. Cho thờm 5ml nước cất để phõn lớp
- Sau 20 phỳt để phõn lớp ta thu lấy lớp n hexan. (đựng trong cốc A)
- Làm khan với Na2SO4 : cõn 10g Na2SO4 , được rang khụ bằng bếp điện trong 20 phỳt, đến khi Na2SO4 bỏm lờn thành cốc. Sau đú đổ ngay vào cốc A. Na2SO4 biến từ màu trắng đục sang màu trắng trong ( do nú hỳt nước). Tiếp
tục đổ vào cho đến khi nú lại chuyển sang màu trắng đục. Sau đú đem đi lọc qua phễu lọc.
- Cụ cất loại dung mụi
- Hũa tan trong 2ml THF rồi mang đi phõn tớch.
Chỳ ý : Mỗi phương phỏp làm 3 mẫu.
* Sau khi thu mẫu ta đem đi phõn tớch trong mỏy HPLC với cỏc điều kiện :
- Điều kiện sắc kớ : giống như điều kiện chạy đường chuẩn
- Cỏch tiến hành
Tiờm riờng biệt 20àl mỗi dung dịch thử và dung dịch chuẩn hỗn hợp vào mỏy sắc kớ lỏng. Tiến hành sắc ký theo điều kiện đó mụ tả ở trờn, ghi thời gian lưu và diện tớch của từng pic licopene và β-carotene trong mỗi dung dịch.