- Các cht đ iu kh in sinh trấ ềể ưởng.
7.4.2.4.Các phương pháp là mb t tt bào ế
Có ba phương pháp đ làm cho các t bào lymphocyte đ c hi u kháng nguyênể ế ặ ệ
tr thành b t t : ở ấ ử
a) T i n p (transfection) v i t bào ung th đ thành dòng t bào bi n hình.ả ạ ớ ế ư ể ế ế
b) Lai (hybridization) lymphocyte v i t bào ung th thích h p (myeloma) đớ ế ư ợ ể
thành d ng lai (hybridoma).ạ
c) S bi n hình kéo dài theo nhi m virus Epstein Barr (EBV) đ thành dòng tư ế ễ ể ế
bào nguyên bào lympho (lymphoblastoid). R i các t bào đó đồ ế ược lai đ tr thànhể ở
hybridoma.
S lai t o là h p nh t các t bào lymphocyte mi n d ch v i các t bào ung thự ạ ợ ấ ế ễ ị ớ ế ư
lympho đ t o ra các t bào này ti p t c bài ti t các kháng th , đ ng th i l i b t tể ạ ế ế ụ ế ể ồ ờ ạ ấ ử
vì là t bào ch a gene ung th . T l h p nh t t bào ngế ứ ư ỷ ệ ợ ấ ế ười thì th p, m c tấ ở ứ ừ
0,08 x 10-7 t i 60 x 10ớ -7. Trong khi đó t l lai t o c a lymphocyte chu t là t 30xỷ ệ ạ ủ ộ ừ
10-7 t i 60 x 10ớ -7. T l lai t o th p do tính không b n c a các t bào lai, mà các tỷ ệ ạ ấ ề ủ ế ế
bào lai đó ch a m t lứ ộ ượng l n nhi m s c th g p 2 ho c 3 l n bình thớ ễ ắ ể ấ ặ ầ ường. Thông tin di truy n cho tính đ c hi u kháng th n m ít nh t hai nhi m s c th tề ặ ệ ể ằ ấ ở ễ ắ ể ương đ ng, c hai c a chúng đ u c n có m t trong nhân và đồ ả ủ ề ầ ặ ược bi u hi n b i t bàoể ệ ở ế
s n xu t kháng th và bài ti t liên t c. S m t nhi m s c th tả ấ ể ế ụ ự ấ ễ ắ ể ương ng hay m tứ ấ
s bi u hi n c a chúng có th d n đ n t bào bài ti t s tr thành không bài ti t.ự ể ệ ủ ể ẫ ế ế ế ẽ ở ế
M t trong nh ng giai đo n đ u tiên và là ch y u là ch n l c thu n hoá tộ ữ ạ ầ ủ ế ọ ọ ầ ế
bào giai đo n r t s m. S thu n hoá đở ạ ấ ớ ự ầ ược ti n hành t nh ng t bào đ n gi n,ế ừ ữ ế ơ ả
nh ng nhi u t bào bài ti t kháng th thì không l n lên t t bào đ n gi n, do đóư ề ế ế ể ớ ừ ế ơ ả
vào nuôi c y đ thu n hoá trong giai đo n s m c a s l n lên c a t bào. S thu nấ ể ầ ạ ớ ủ ự ớ ủ ế ự ầ
hoá thường được nh c l i cho đ n khi chúng l n lên và bài ti t đắ ạ ế ớ ế ược kháng thể
đ c hi u. Vì giai đo n này nó thặ ệ ở ạ ường được coi là đã t o đạ ược dòng t bào b n.ế ề
Song s thu n hoá v n c n đự ầ ẫ ầ ược nh c l i.ắ ạ
Ngượ ạ ớc l i v i hi u qu th p c a s h p nh t t bào ngệ ả ấ ủ ự ợ ấ ế ười, s nhi m vàự ễ
bi n d ng c a các lymphocyte b i virus Epstein Barr (EBV) đ t o thành t bàoế ạ ủ ở ể ạ ế
lymphoblast x y ra t n s cao 1 x 10ẩ ở ầ ố -1. EBV là m t virus herpes làm nhi m trùngộ ễ
các t bào lymphocyte B gây nên b nh viêm s t h ch (mononucleosis). H u h tế ệ ố ạ ầ ế
nh ng ngữ ười trưởng thành th gi i phở ế ớ ương Tây đã bi u hi n EBV và chúng cóể ệ
m t qu n th lymphocyte tu n hoànộ ầ ể ầ có th ngăn c n s nhi m EBV ti p t c.ể ả ự ễ ế ụ
K thu t hybridoma-EBV đỹ ậ ược k t c u b i m t dòng nguyên bào lymphoblastế ấ ở ộ
(KR4) đã được phát tri n v i s nh y c m HAT (môi trể ớ ự ạ ả ường l a ch n có ch aự ọ ứ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Hypoxanthin, Aminopterin và Thymidin) và kháng ouabain lai v i dòng s n xu tớ ả ấ
kháng th .ể
M t hộ ướng khác là dùng nh ng đo n DNA ho c là c a t bào ung th ho c làữ ạ ặ ủ ế ư ặ
c a virus đ gây ra s hình thành nh ng dòng t bào b bi n hình t nh ng t bàoủ ể ự ữ ế ị ế ừ ữ ế
lympho bài ti t kháng th . Tuy nhiên k thu t này đế ể ỹ ậ ược coi nh là m t s truy nư ộ ự ề
nhi m nên không ch c ch n và t bào đễ ắ ắ ế ược truy n nhi m thì l n lên ch m h n.ề ễ ớ ậ ơ
7.4.2.5. S d ng h p các thành viên lai v i nhau và phử ụ ợ ớ ương pháp l aựch n t bào lai.ọ ế