6. Ligase (synthetase)
4.3.Hot đ enzyme ộ
4.3.1. Phương pháp xác đ nh ho t đ enzymeị ạ ộ
Trong enzyme h c, ngọ ười ta không đ nh lị ượng enzyme m t cách tr c ti p màộ ự ế
thường xác đ nh gián ti p thông qua xác đ nh m c đ ho t đ ng (ho t đ ) c aị ế ị ứ ộ ạ ộ ạ ộ ủ
enzyme. Trong phán ng có enzyme xúc tác, s ho t đ ng c a enzyme đứ ự ạ ộ ủ ược bi uể
hi n b ng cách làm thay đ i các tính ch t v t lý, hóa lý cũng nh tính ch t hóa h cệ ằ ổ ấ ậ ư ấ ọ
c a h n h p ph n ng. Theo dõi nh ng bi n đ i đó có th bi t đủ ỗ ợ ả ứ ữ ế ổ ể ế ược chính xác m c đ ho t đ ng c a enzyme thông qua xác đ nh c ch t b m t đi hay lứ ộ ạ ộ ủ ị ơ ấ ị ấ ượng s nả
ph m đẩ ượ ạc t o thành trong ph n ng.ả ứ
V nguyên t c, có th chia ra ba nhóm phề ắ ể ương pháp sau:
- Đo lượng c ch t b m t đi hay lơ ấ ị ấ ượng s n ph m đả ẩ ượ ạc t o thành trong m tộ
th i gian nh t đ nh ng v i m t n ng đ enzyme xác đ nh.ờ ấ ị ứ ớ ộ ồ ộ ị
- Đo th i gian c n thi t đ thu đờ ầ ế ể ược m t lộ ượng bi n thiên nh t đ nh c a cế ấ ị ủ ơ
- Ch n n ng đ enzyme nh th nào đ trong m t th i gian nh t đ nh thuọ ồ ộ ư ế ể ộ ờ ấ ị
đượ ự ếc s bi n thiên nh t đ nh v c ch t hay s n ph m.ấ ị ề ơ ấ ả ẩ
4.3.2. Đ n v ho t đ enzyme ơ ị ạ ộ
- Đ n v ho t đ enzyme (U) là lơ ị ạ ộ ượng enzyme có kh năng xúc tác làmả
chuy n hóa m t micromol (1ể ộ µmol) c ch t sau m t phút đi u ki n tiêu chu n.ơ ấ ộ ở ề ệ ẩ
1 U = 1µmol c ch t (10ơ ấ -6 mol)/ phút.
- Katal (Kat) là lượng enzyme có kh năng xúc tác làm chuy n hóa 1 mol cả ể ơ
ch t sau m t giây đi u ki n tiêu chu nấ ộ ở ề ệ ẩ .
Đ i v i ch ph m enzyme, ngoài vi c xác đ nh m c đ ho t đ ng còn c nố ớ ế ẩ ệ ị ứ ộ ạ ộ ầ
ph i đánh giá đ s ch c a nó. Đ i lả ộ ạ ủ ạ ượng đ c tr ng cho đ s ch c a ch ph mặ ư ộ ạ ủ ế ẩ
enzyme là ho t đ riêng.ạ ộ
- Ho t đ riêng c a m t ch ph m enzyme là s đ n v UI (ho c s đ n vạ ộ ủ ộ ế ẩ ố ơ ị ặ ố ơ ị
Katal) ng v i 1 ml dung d ch ho c 1mg protein (n u là b t khô) c a ch ph mứ ớ ị ặ ế ộ ủ ế ẩ
enzyme. Ví d :ụ
+ m t dung d ch enzyme ch a 10 UI (ho c 166,7 nKat) trong 1mlộ ị ứ ặ
+ ho c m t b t enzyme ch a 10 UI (ho c 166,7 nKat) trong 1mgặ ộ ộ ứ ặ
protein
Khi đã bi t kh i lế ố ượng phân t c a enzyme thì có th tính ho t đ riêng phânử ủ ể ạ ộ
t .ử
- Ho t đ riêng phân t là s phân t c ch t đạ ộ ử ố ử ơ ấ ược chuy n hóa b i m t phânể ở ộ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
t enzyme trong m t đ n v th i gian. Nh v y, ho t đ riêng phân t chính là khử ộ ơ ị ờ ư ậ ạ ộ ử ả
năng xúc tác c a enzyme nghĩa là ho t đ phân t càng cao thì kh năng xúc tácủ ạ ộ ử ả
càng l n.ớ
Khi xác đ nh ho t đ enzyme c n chú ý m t s đi m sau:ị ạ ộ ầ ộ ố ể
- N ng đ c ch t trong ph n ng ph i trong m t gi i h n thích h p đồ ộ ơ ấ ả ứ ả ở ộ ớ ạ ợ ủ
th a đ bão hòa enzyme nh ng không quá cao đ đ n m c kìm hãm enzymeừ ể ư ể ế ứ
- V i nh ng enzyme c n có ch t ho t hóa ho c ch t làm b n thì ph i cho cácớ ữ ầ ấ ạ ặ ấ ề ả
ch t này vào enzyme trấ ước khi cho c ch t vào h n h p ph n ngơ ấ ỗ ợ ả ứ
1 Kat = 1 mol c ch t/giâyơ ấ
- Xác đ nh ho t đ c n ti n hành pH thích h p và c đ nhị ạ ộ ầ ế ở ợ ố ị
- Nhi t đ ph i th p h n nhi t đ t i u c a enzyme đ đ phòng tác d ngệ ộ ả ấ ơ ệ ộ ố ư ủ ể ề ụ
kìm hãm enzyme do nhi t đ caoệ ộ
- Th i gian xác đ nh ho t đ thờ ị ạ ộ ường t 5 đ n 30 phút, có th kéo dài 24 giừ ế ể ờ
n u ho t đ c a enzyme quá th p. Trong trế ạ ộ ủ ấ ường h p này c n ph i cho thêm vàoợ ầ ả
dung d ch các ch t di t vi sinh v t và tránh dùng nh ng dung d ch đ m thu n l iị ấ ệ ậ ữ ị ệ ậ ợ
cho s phát tri n c a vi sinh v tự ể ủ ậ
Chương 5