- Các cht đ iu kh in sinh trấ ềể ưởng.
7.4.1.Nguyên tc và đi ukin sn x ut protein ấ
Vi c tách chi t đ s n xu t protein t ngu n đ ng v t tuỳ theo m c đích đệ ế ể ả ấ ừ ồ ộ ậ ụ ể
l a ch n ph n mô có s tích lu h p ch t đó l n nh t, ch ng h n s n xu t insulinự ọ ầ ự ỹ ợ ấ ớ ấ ẳ ạ ả ấ
thường tách chi t t tuy n t y, các enzyme tiêu hoá nh pepsin, tripsin, đế ừ ế ụ ư ượ ừc t niêm m c d dày v.v... vi c tách chi t các h p ch t này t t nh t toàn b quá trìnhạ ạ ệ ế ợ ấ ố ấ ộ
ti n hành trong phòng l nh và đ u thế ạ ề ường d a trên nguyên t c và các bự ắ ước chung sau đây:
- Ly tâm thu d ch l ng và lo i b ph n b .ị ỏ ạ ỏ ầ ả
- K t t a d ch l ng (có th dùng mu i hay dung môi h u c ).ế ủ ị ỏ ể ố ữ ơ
- Ly tâm thu ph n d ch n i (ph n t a), ta đầ ị ổ ầ ủ ược ch ph m thô.ế ẩ
- Tinh s ch b ng s c ký, đ thu ch ph m có đ tinh khi t cao.ạ ằ ắ ể ế ẩ ộ ế
Tuy nhiên tuỳ theo t ng lo i h p ch t mong mu n đ có nh ng thay đ i đi uừ ạ ợ ấ ố ể ữ ổ ề
ki n thích h p khi s n xu t. Ví d : nh ng peptide tách t t bào b ch c u trongệ ợ ả ấ ụ ữ ừ ế ạ ầ
s n xu t kháng th đ n dòng, thả ấ ể ơ ường dùng các dung d ch có tính acid và g m cácị ồ
bước nh sau:ư
- Các t bào b ch c u đế ạ ầ ược thu nh n b ng ly tâm trong đi u ki n l nh cùngậ ằ ề ệ ạ
v i ch t ch ng đông máu.ớ ấ ố
- Chi t b ng đ m pH=7,5-8,0 (thế ằ ệ ường là đ m Tris-HCl, n ng đ 20-50 mM,ệ ồ ộ
ch a 50 nM NaCl).ứ
- Ly tâm thu ph n l ng.ầ ắ
- Nghi n v i dung d ch có tính acid (thề ớ ị ường 15- 20mm HCl). - Ly tâm thu d ch n i ta đị ổ ược dung d ch ch a peptide.ị ứ