Như ñã trình bày ở phần cấu tạo, kháng nguyên O có bản chất là polysaccharide, có khả năng chịu nhiệt 1000C trong 2h, kháng nguyên O của một vài chủng dạng nhầy có khả năng chịu ñược nhiệt ñộ 1200C trong khoảng thời gian 2 h. Kháng nguyên O kích thích các cơ quan ñáp ứng miễn dịch hình thành kháng thể ñặc hiệu ngưng kết với kháng nguyên O tương ứng. Tuy nhiên, khi nghiên cứu một số ñặc ñiểm huyết thanh học, rất nhiều tác giả nhận thấy có hiện tượng ngưng kết chéo giữa các nhóm kháng nguyên O với nhau. Hiện tượng ngưng kết chéo ñã gây nên rất nhiều khó khăn khi phân nhóm huyết thanh E.coli, do vậy ñã có rất nhiều nghiên cứu tập trung giải quyết mối liên hệ trên ñây (Orskov và cs, 1977).
+ Hiện tượng ngưng kết chéo giữa các nhóm kháng nguyên O E.coli
Kháng nguyên O không phải là kháng nguyên ñơn lẻ, ñược cấu tạo bởi một vài thành phần kháng nguyên, do vậy ñược gọi là kháng nguyên nhóm O. Các kháng nguyên nhóm O có một vài thành phần giống nhau do vậy chúng có thể ngưng kết chéo với nhau. Rất nhiều phản ứng ngưng kết chéo xảy ra giữa các nhóm kháng nguyên O. Một số yếu tố huyết thanh O hấp phụ chéo là
ñiều cần quan tâm khi xem xét kháng nguyên O. Tuy nhiên, khi sử dụng những huyết thanh này chúng ta gặp phải những khó khăn ñể có thể kết luận liệu một chủng chưa biết thực sự thuộc một nhóm kháng nguyên O nhất ñịnh, phân biệt rõ ràng với các nhóm khác. Chỉ những huyết thanh sau khi ñã hấp phụ chéo mới cho kết quả chính xác (Edwards và Ewing, 1972).
+ Hiện tượng ngưng kết chéo giữa các nhóm kháng nguyên O vi khuẩn E.coli với một số thành viên họ vi khuẩn ñường ruột
Rất nhiều phản ứng ngưng kết chéo xảy ra giữa các nhóm kháng nguyên O vi khuẩn E.coli với kháng thể kháng kháng nguyên O Shigella.
Ewing và cộng sự (1952), Edwards và Ewing (1972) cho biết có một số serovar Shigella có các nhóm kháng nguyên O gần giống với một vài
serotype E.coli gây bệnh giống bệnh lỵ (dysentery-like disease). E.coli
O28ac ngưng kết chéo với Shigella boydii 13, E.coli O53 với Shigella boydii,
E.coli O124 với Shigella dysenteriae 3, E.coli O144 với Shigella dysenteriae
10, E.coli O144 với Shigella dysenteriae 10.
Ngưng kết chéo giữa kháng nguyên O của E.coli với Klebsiella pneumoniae cũng xảy ra trong một số serotype có các nhóm kháng nguyên O
tương ñồng. Hiện tượng trên ñã ñược Kauffmann (1949), Orskov và cs (1977) kiểm tra: Kháng nguyên O9 của E.coli ngưng kết với O3 Klebsiella pneumoniae, O20 với O4, O8 với O5, O19ab với O1, O19b.
+ Hiện tượng ngưng kết chéo giữa kháng nguyên O vi khuẩn E.coli với vi khuẩn khác
Ngoài hiện tượng ngưng kết chéo giữa các kháng nguyên O của các thành viên thuộc họ vi khuẩn ñường ruột, kháng nguyên O của vi khuẩn E.coli còn có khả năng ngưng kết với các nhóm kháng nguyên khác. Winkle và cộng sự (1972) (trích dẫn bởi Orskov và cs, 1977) ñã mô tả mối quan hệ giữa kháng
nguyên O vi khuẩn Vibrio cholerae với các thành viên thuộc họ vi khuẩn
ñường ruột và ñi ñến kết luận một số nhóm kháng nguyên O vi khuẩn Vibrio
cholerae có khả năng ngưng kết chéo với một số nhóm kháng nguyên O của
vi khuẩn E.coli, Salmonella, Citrobacter.
Nghiên cứu hiện tượng ngưng kết xảy ra trong các nhóm máu người, tác giả ñã phát hiện kháng nguyên O86 của vi khuẩn E.coli có khả năng ngưng kết chéo với kháng nguyên trên bề mặt hồng cầu thuộc nhóm máu B ở người. Tương tự như vậy, một số nhóm kháng nguyên O E.coli có khả năng
ngưng kết với kháng nguyên bề mặt tế bào ñộng vật có vú như tế bào thận và một số tế bào nuôi cấy mô khác (Orskov, 1962).